引物设计

质粒与引物设计篇

效率，比如电转化比化学转化的效率更高。   3. 如何设计目的片段引物？ PCR 引物设计，是决定实验是否成功的重要一环，现有的 PCR 设计工具，比如‌Primer-BLAST (NCBI)、Primer Designer Tool (Thermo Fisher)、 Primer3 等都可以针对目标序列设计出相应的引物，可以根据目标序列特征、实验室资源来选择合适的引物设计工具。如果后续通过无缝克隆的方法构建载体，在设计 PCR 引物时，还需要将同源臂序列添加到上下游引物的两端。具体添加方法可参考所用的同源

PCR 引物设计小技巧，你 get 了吗？

的。 11、引物应具有特异性 引物设计完成以后，应对其进行 BLAST 检测。如果与其它基因不具有互补性，就可以进行下一步的实验了。值得一提的是，各种模板的引物设计难度不一。有的模板本身条件比较困难，例如 GC 含量偏高或偏低，导致找不到各种指标都十分合适的引物；用作克隆目的的 PCR，因为产物序列相对固定，引物设计的选择自由度较低。在这种情况只能退而求其次，尽量去满足条件。做 Real Time 时，用于 SYBR Green I 法时的一对引物与一般 PCR 的引物，在引物设计上所要求的参数是不同

4 分钟教你学会多重 PCR 引物设计

于扩增 5~10 个目的片段，原因之一是反应中，每另加入一对引物会导致一定程度的灵活性的丢失。引物数量的增加也使引物二聚体和非特异扩增出现的概率增加。因此，进行多元 PCR 要求周密计划，且需多次尝试，使反应条件优化。 理论上，一个多元反应中，所有引物扩增其特异序列的效率应该是一样的，但通常是很难预测一对引物的效率。在相似条件下，退火温度几乎相同的寡核苷酸可更好地工作。 多元 PCR 引物设计和优化的一般规律 当设计 MPCR 引物时，除了引物设计的一般规律外，其他一些因素也必须考虑