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- 2025年12月29日
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上海达为科生物科技有限公司
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RNA干扰实验
RNA干扰( SiRNA实验)流程：
确定干扰基因， 设计并合成合适的小干扰RNA (片段型或载体型小干扰RNA)。
预转染实验，进行细胞培养，摸索转染条件、时间并进行必要的检测(WB、PCR等)，确定干预效果的一对小RNA。
第三步正式实验，设置合理实验分组，进行瞬时或稳定转染。
第四步转染后检测，根据实验要求选择细胞生物学检测、蛋白检测、分子生物学检测等。以研究小干扰RNA对于细胞、蛋白或基因功能的影响。RNA干扰( SiRNA实验)检测(可根据委托者实验需求选择做)
1.细胞检测:细胞增殖毒性MTT、细胞凋亡、细胞周期、细胞迁移、细胞侵袭;
2.蛋白检测:免疫印迹WB、免疫细胞化学ICC、免疫荧光IF、流式细胞术FCM、酶联免疫EL SIA;
3.分子生物检测: RT-PCR、实时荧光定里PCR、甲基化特异性PCR(MSP);
4.其他检测:生化检测、酶类检测、脂类检测、糖类检测。
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文献和实验酶(RdRp) 作用下以靶mRNA 为模板合成dsRNA ,后者可被降解形成新的siRNA ;新生成的siRNA又可进入上述循环。新生的dsRNA 反复合成和降解,不断产生新的siRNA ,从而使靶mRNA 渐进性减少,呈现基因沉默现象. RNA干扰实验 将制备好的siRNA和其表达载体转导至真核细胞中的方法主要有以下几种：磷酸钙共沉淀、电穿孔法、 DEAE- 葡聚糖和 polybrene 、机械法（显微注射和基因枪）、阳离子脂质体试剂，其中阳离子脂质体试剂转染法是目前最常用的转染
在哺乳动物细胞中进行RNA干扰:设计，实验和分析siRNA效应
在哺乳动物细胞中进行RNA干扰:设计，实验和分析siRNA效应 转录后基因沉默，也称为RNA干扰，是指双链RNA分子阻断或者降低同源基因的表达的现象。这种现象可能是作为一种抑制病毒感染和转座子跳跃的细胞防御机制(Ketting et. al., 1999; Tabara et. al., 1999; Jensenet. al., 1999; Ratcliff et. al., 1999)。在体内，双链RNA被内源的核糖核酸酶降解为21-23个碱基大小的小分子干扰RNA（small
步骤包括: (一)siRNA的设计 1. 在设计RNAi实验时，可以先在以下网站进行目标序列的筛选： Genesil Ambion 2. RNAi目标序列的选取原则： (1)从转录本（mRNA）的AUG起始密码开始，寻找“AA”二连序列，并记下其3'端的19个碱基序列，作为潜在的siRNA靶位点。有研究结果显示GC含量在45%—55%左右的siRNA要比那些GC含量偏高的更为有效。 Tuschl等建议在设计siRNA时不要针对5'和3'端的非编
