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        【资源】RNA干扰

        丁香园论坛

        4483
        <center> <strong>RNA干扰</strong></center>

        RNA干扰(RNA interference,缩写为RNAi)是指一种分子生物学上由双链RNA诱发的基因沉默现象,其机制是通过阻碍特定基因的翻译转录来抑制基因表达。当细胞中导入与内源性mRNA编码区同源的双链RNA时,该mRNA发生降解而导致基因表达沉默。RNAi在基因沉默(silent gene)方面具有高效性和简单性,所以是基因功能研究的重要工具。

        siRNA是一类长约21~25 个核苷酸的双链小RNA分子,可作为一种特殊引物,在RNA 依赖RNA聚合酶(RdRp) 作用下以靶mRNA 为模板合成dsRNA ,后者可被降解形成新的siRNA ;新生成的siRNA又可进入上述循环。新生的dsRNA 反复合成和降解,不断产生新的siRNA ,从而使靶mRNA 渐进性减少,呈现基因沉默现象.

        RNA干扰实验

        将制备好的siRNA和其表达载体转导至真核细胞中的方法主要有以下几种:磷酸钙共沉淀、电穿孔法、 DEAE- 葡聚糖和 polybrene 、机械法(显微注射和基因枪)、阳离子脂质体试剂,其中阳离子脂质体试剂转染法是目前最常用的转染方法。

        脂质体型转染

        一、注意事项

        1. 转染试剂的用量
        2. siRNA(小干扰RNA)的用量
        3. 转染时的细胞密度
        4. 转染时的操作顺序
        5. 细胞与转染试剂 /siRNA(小干扰RNA)复合物的温浴的时间


        二、转染步骤

        选用生理状态良好的细胞对提高转染效率很重要. siRNA和脂质体的用量和两者的比例可在推荐范围内适当调整。

        1. 转染前一天, 将细胞接种在 6孔板上,24小时贴壁后细胞密度达到70%-90%;
        2.
        转染前,用基础培养基opti-MEM漂洗细胞2次,加入无血清基础培养基opti-MEM 1.5mL;

        3. 将溶解后的siRNA稀释于250?l无血清的基础培养基opti-MEM中;取5-10ul脂质体混匀于250?l无血清的基础培养基opti-MEM中。静置5min;

        4. 将脂质体稀释液及siRAN稀释液混合,轻轻混匀,室温放置20分钟;

        5. 将脂质体-siRNA混合液加入细胞培养孔中;

        6. 6小时后吸弃转染复合物,换入含10%胎牛血清的新鲜培养基;
        7. 细胞在 CO2 培养箱中 37 ℃温育 24h-48h 后,进行转染后的其它检测步骤.

        【资源】RNA干扰

        广州朗日生物技术有限公司是国内较大的对外提供技术服务的公司,致力于最前沿的生命科学技术研究。主要的研究方向有:肿瘤疾病,心血管疾病,内分泌类疾病,肾脏病学类疾病,干细胞,药物筛选等。技术中涉及的领域包括:细胞生物学、分子生物学、免疫与蛋白组学、动物模型构建、药物筛选和转基因小鼠等。并且成功建立细胞库,载体库,病毒库等,可以为广大生物医药企事业单位提供全方位的服务并广泛提供分子生物学﹑细胞生物学等生命科学领域的实验整体技术服务及相关的科研指导,包括:实验课题的设计→实验技术的操作→数据的处理分析→文章的撰写,为广大的医学研究员解决科研工作中的繁琐问题,为在生命科学领域进行探索研究的客户创造有利条件



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