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- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
33
- 英文名：
Western Transfer Buffer
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
1L|10×1L
1、Western转膜液说明书贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称：Western转膜液说明书
英文名称：Western Transfer Buffer
产品规格：1L|10×1L
发货周期：1～3天
本品可以用于Western时湿法电转膜。本Western转膜液是一种安全无毒的转膜液，没有使用剧毒的甲醇，也没有使用其它的有毒试剂。本Western转膜液配制便捷，无需调节pH值。本Western转膜液可以回收，回收后可以再使用2-3次。
注意事项
1.如果转膜液颜色变成浅棕色或黄褐色，应该丢弃。
2.建议使用分析纯级别的乙醇或更高纯度的乙醇。
储存条件室温，有效期两年。
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
4NOCTYLOXYBENZALDEHYDE424083134
NMethyl pyrrole196548
NAcetylsulfanilyl chloride对酰酰121608
Trityl azide叠三14309252
3METHYLCYCLOHEXANONE3环591242
6CARBOXYFLUORESCEIN DIACETATE6羧荧光素二528938
4ACETAMIDOCYCLOHEXANOL4酰环23363884
4Hydroxyquinoline4羟611369
METHYL 4HYDROXY3IODOBENZOATE4羟315126064
2ACETYLCYCLOHEXANONE2酰环874237
SILVER DIETHYLDITHIOCARBAMATE砷试剂1470617
1,3Dichloro2propanol1,3二96231
5Hydroxyindole5羟吲哚1953544
6Methyl1indanone61茚24623209
2Benzothiazolol2羟并噻唑934349
Ferrozine 含量：≥98% 规格：10mg/支
异荧光素 含量：≥98% 规格：10mg/支
FITC 含量： 规格：10mg/支
荧光 含量：≥ 98% 规格：20mg/支
Fluorescamine 含量： 规格：20mg/支
荧光素 含量：≥98% 规格：20mg/支
Fluorescein 含量：≥98% 规格：20mg/支
二荧光素 含量：≥98% 规格：20mg/支
Western转膜液说明书DYDC1DYDC1蛋白抗体大鼠多巴D1受体(D1R)ELISA试剂盒58559
DHP/Dihydropyrimidinase二嘧啶抗体大鼠能a1A受体(ADRA1A)ELISA试剂盒58559
DPYD二嘧啶脱酶抗体大鼠钙结合蛋白(CR)ELISA试剂盒148798
DPY19L1短粗矮胖19蛋白样1抗体大鼠透明质结合蛋白(HABP)ELISA试剂盒24539
VAV2癌VAV2抗体大鼠骨形成蛋白6(BMP6)ELISA试剂盒
DPY19L2DPY19L2蛋白抗体大鼠淋巴细胞子ELISA试剂盒52239631
DPY19L4DPY19L4蛋白抗体大鼠N酰丝酰天门冬酰赖酰脯(AcSDKP)ELISA试剂盒1179697
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文献和实验没有SDS? zhanghai123 还有1g SDS aileen83 我做western的转膜缓冲液：Tris:3g, Glycine:14.4g,methanol: 200ml. 共1000ml 不知道是否能对你有用 haodanzhang 配制转膜液时，甲醇不宜过早加入。个人认为不用加SDS，因为加入SDS后会有气泡产生。转膜条件我的一般是：300mA, 2h,效果
刚开始做 Western blot 的同学们想必都大多都是研究生，虽然科研经历还不是特别丰富，但情感经历一定都比较丰富吧。同学们想想自己刚谈恋爱的时候，你刚喜欢一个人却还没表白之前，是不是每天都要想尽一切办法了解他 / 她的爱好，他 / 她的习惯，他 / 她每天的路线等等，等你心里有数之后再开始考虑如何表白？做实验也一样，在开始 Western 之前，尽可能多的了解你的目的蛋白，这和谈恋爱一样，这样表白成功的概率才会大大增加。当然，表白失败也很正常，我们之前做的功课只是增加成功的概率而已，并不
。也可以用考马斯亮蓝快速染色液对完成转膜的SDS-PAGE胶进行染色，以观察蛋白的残留情况。 4. 封闭(Blocking)： 转膜完毕后，立即把蛋白膜放置到预先准备好的Western洗涤液中，漂洗1-2分钟，以洗去膜上的转膜液。吸尽洗涤液，加入Western封闭液，在摇床上缓慢摇动,室温封闭60分钟。 从转膜完毕后所有的步骤，一定要注意膜的保湿，避免膜的干燥，否则极易产生较高的背景。 对于一些背景较高的抗体，可以4℃封闭过夜。 5. 一抗
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