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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
35
- 英文名:
Nuclear Yellow(Hoechst S769121)
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海研生
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
10mg
一、神经元示踪剂—核黄规格分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称:神经元示踪剂—核黄规格英文名称:Nuclear Yellow(Hoechst S769121)
产品规格:10mg
发货周期:1~3天
分子量651.01
外观淡黄色粉末
溶剂水或者DMSO
光学特性Excitation=355nm;Emission=495nm.
储存-20℃,避光,有效期两年。
Hoechst系列染料是一类可用于应用于荧光显微镜和流式细胞术分析的标记DNA的荧光家族染料。因其可以标记DNA,所以这类染料被广泛的应用于细胞核和线粒体的可视化定位。Hoechst33258和Hoechst33342作为类二苯甲亚胺的染料,是其中最广泛应用的核酸染料。这两种染料都可以被350nm左右的紫外光激发,发射461nm左右的蓝紫色荧光。Hoechst染料可以用于固定或者活细胞染色,也通常被用于另一种核酸染料的替代物,DAPI。他们之间重要的区别在于Hoechst33342的乙基可以使其更具有亲脂性,因此更易于穿过细胞膜。在一些应用中,Hoechst33258相比Hoechst33342表现出较差的膜透性。这类染料也常被用于检测样本DNA的含量,只需要设置一个荧光强度-DNA含量之间的标准曲线即可。
本产品是一种长波的核黄染料,通用和退行性示踪标志染料真蓝做神经元的双色标记。在神经元细胞中,核黄优先染色细胞核为黄色荧光,而真蓝作为一种紫外激发光激发的二价阳离子染料可以染色细胞质为蓝色荧光。两种染料在免疫组织化学应用中的表现都非常稳定,可以用于和DAB染料的联合应用。当Hoechst33258、Hoechst33342和核黄通过轴突逆行运输到母细胞体后,可能会迁出轴突和母细胞体,因此可以作为毗邻神经胶质细胞细胞核的荧光染料。这种迁出现象在体内和体外的研究中,当您将切片保存于水性环境下,都有发现。使用1%示踪剂时,活体内的迁出现象可以通过限制动物的生存时间而加以控制。体外的迁出现象可以通过材料组织的快速处理来避免。
注意事项:
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响,但为取得良好的使用效果,3-6个月内推荐4℃保存,并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染,会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶,需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC,导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭,在进行荧光观察时,尽量缩短观察时间,同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时,如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞,并且通过调整相关设置和参数也无法改善,可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测,这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
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