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- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期:
有效期1年
- 英文名:
Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit
- 库存:
大量
- 供应商:
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 保存条件:
-20℃避光
- 规格:
20T(40302ES20)/50T(40302ES50)/100T(40302ES60)/5T(40302ES08)
| 规格: | 20T(40302ES20) | 产品价格: | ¥480.00 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 50T(40302ES50) | 产品价格: | ¥960.00 |
| 规格: | 100T(40302ES60) | 产品价格: | ¥1680.00 |
| 规格: | 5T(40302ES08) | 产品价格: | ¥120.00 |
Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒是用FITC标记的Annexin V作为探针,来检测细胞早期凋亡的发生。
其检测原理为:在正常的活细胞中,磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine,PS)位于细胞膜的内侧,但在早期凋亡的细胞中,PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ(膜联蛋白-V)是一种分子量为35-36 kDa的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力结合,可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。
另外,本试剂盒中还提供了碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。PI是一种核酸染料,它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜,但可以透过凋亡晚期和坏死细胞的细胞膜而使细胞核染红。因此,将Annexin V与PI联合使用时,PI 则被排除在活细胞(Annexin V-/PI-)和早期凋亡细胞(Annexin V+/PI-)之外,而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被FITC 和PI 结合染色呈现双阳性(Annexin V+/PI+)。
本试剂盒可用于流式细胞仪、荧光显微镜进行检测。
产品组分

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编号 |
组分 |
产品编号/规格 | ||
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40302ES20 |
40302ES50 |
40302ES60 | ||
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40302-A |
Annexin V-FITC |
100 μL |
250 μL |
500 μL |
|
40302-B |
PI Staining Solution |
200 μL |
500 μL |
1.0 mL |
|
40302-C |
1×Binding Buffer |
10 mL |
25 mL |
50 mL |
运输与保存方法
冰袋(wet ice)运输。-20℃避光保存,避免反复冻融,一年有效。
【注】:如果需要在短时间内多次重复使用,可以在4℃避光保存,半年有效。
注意事项
1)由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤。胰酶消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤;PI摄入过多,消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-FITC的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后,轻摇使胰酶与细胞充分接触,然后倒掉大部分胰酶,利用剩余少量胰酶再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA,EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3)如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
4)试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
5)Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。
6)本产品仅作科研用途!
操作方法
1.1 样品染色
1)悬浮细胞:300 g,4℃离心5 min收集细胞。
贴壁细胞:用不含EDTA的胰酶消化后,300 g,4℃离心5 min收集细胞。胰酶消化时间不宜过长,以防引起假阳性。
2)用预冷的PBS洗涤细胞2次,每次均需300 g,4℃离心5 min。收集1~5×105细胞。
3)吸弃PBS,加入100 μL 1×Binding Buffer重悬细胞。
4)加入5 μL Annexin V-FITC和10 μLPI Staining Solution,轻轻混匀。
5)避光、室温反应10-15 min。
6)加入400 μL 1×Binding Buffer,混匀后放置于冰上,样品在1小时内用流式细胞仪或荧光显微镜检测。
【注】:为了避免洗涤细胞时损失细胞,在吸液时可以用大的Tip头套上小的Tip头吸液。
1.2 样品分析
A.流式细胞仪分析:
FITC最大激发波长为488 nm,最大发射波长525 nm,FITC的绿色荧光在FL1通道检测;PI-DNA复合物的最大激发波长为535 nm,最大发射波长为615 nm,PI的红色荧光在FL2或FL3通道检测。用CellQuest等软件进行分析,绘制双色散点图(two-color dot plot),FITC为横坐标,PI为纵坐标。典型的实验中,细胞可以分成三个亚群,活细胞仅有很低强度的背景荧光,早期凋亡细胞仅有较强的绿色荧光,晚期凋亡细胞有绿色和红色荧光双重染色。
B.荧光显微镜分析:
1)滴一滴用Annexin V-FITC/PI双染的细胞悬液于载玻片上,并用盖玻片盖上细胞。
【注】:对于贴壁细胞,可直接用盖玻片培养细胞并诱导细胞凋亡。
2)在荧光显微镜下用双色滤光片观察。Annexin V-FITC荧光信号呈绿色,PI荧光信号呈红色。
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产品名称 |
货号 |
规格 |
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Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit 细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒 |
40301ES50 |
50 T |
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40301ES60 |
100 T | |
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Annexin V-EGFP/PI 细胞凋亡检测试剂盒 Annexin V-EGFP/PI Apoptosis Detection Kit |
40303ES20 |
20 T |
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40303ES50 |
50 T | |
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40303ES60 |
100 T | |
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50 T | |
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40310ES20 |
20 T |
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40310ES50 |
50 T | |
|
40310ES60 |
100 T |
HB220609
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- 作者
- 内容
- 询问日期
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