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- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
35
- 英文名：
Annexin V-EGFP Apoptosis Detection Kit
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
20次|50次
实验报告：
一、Annexin V-EGFP细胞凋亡检测试剂盒哪家好分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称：Annexin V-EGFP细胞凋亡检测试剂盒哪家好
英文名称：Annexin V-EGFP Apoptosis Detection Kit
产品规格：20次|50次
发货周期：1～3天
本试剂盒是用EGFP标记的重组人AnexinV来检测细胞凋亡时出现在细胞膜表面的磷酯酰丝氨酸的一种细胞凋亡检测试剂盒。一个包装的本试剂盒共可以检测20个样品。可以使用流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检测设备进行检测。
试剂盒组份
AnexinV-EGFP—————————100μl
AnexinV-EGFP结合液——————12ml
碘化丙啶染色液—————————220μl
Anexin是一类广泛分布于真核细胞细胞浆内钙离子依赖的磷酯结合蛋白，参与细胞内的信号转导。但仅AnexinV被报道可以调控一些PKC的活性。
AnexinV选择性结合磷酯酰丝氨酸(phosphatidylserine，简称PS)。磷酯酰丝氨酸主要分布在细胞膜内侧，即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期，不同类型的细胞都会把磷酯酰丝氨酸外翻到细胞表面，即细胞膜外侧。磷酯酰丝氨酸暴露到细胞表面后会促进凝血和炎症反应。而AnexinV和外翻到细胞表面的磷酯酰丝氨酸结合后可以阻断磷酯酰丝氨酸的促凝血和促炎症反应活性。
用带有绿色荧光的荧光探针EGFP标记的AnexinV，即AnexinV-EGFP，就可以用流式细胞仪或荧光显微镜非常简单而直接地检测到磷酯酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。
本试剂盒还提供了碘化丙啶染色液，碘化丙啶(PropidiumIodide,PI)可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞，呈现红色荧光。对于坏死细胞，由于细胞膜的完整性已经丧失，AnexinV-EGFP可以进入到细胞浆内，与位于细胞膜内侧的磷酯酰丝氨酸结合，从而也使坏死细胞呈现绿色荧光。
综上所述，用AnexinV-EGFP和碘化丙啶染色后，正常的活细胞不被AnexinV-EGFP和碘化丙啶染色；凋亡早期的细胞仅被AnexinV-EGFP染色，碘化丙啶染色呈阴性；坏死细胞和凋亡晚期的细胞可以同时被AnexinV-EGFP和碘化丙啶染色。
储存条件4℃避光，有效期6个月。
注意事项：
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
以下是公司正在热销产品：
3,5-二叔基-4-羟酸脂磷壁酸/Lipoteichoic acid
2-溴-4-苯二胺四酸三钾盐/EDTA三钾盐二水合物/EDTA-三钾/EDTA-3K
N,N,N-三基二胺二胺四酸二钾盐/二胺四酸钾/EDTA-2K
4-溴-2-氟三苯基磺酸/磺酸/烷磺酸/MSA
N-Boc-4-酸酯啶2--1-磺酸/托拜厄斯酸/2--1-磺酸/2-氨基-1-萘磺酸/脱拜厄斯酸/吐氏酸/2-Naphthylamine-1-sulfonic acid
代肟基酸酯1，5-萘二磺酸钠/1,5-萘二磺酸二钠盐/萘-1,5-二磺酸钠盐/Sodium 1,5-naphthalenedisulfonate dibasic
3,4,5-三硼酸磺基水杨酸钠/磺柳酸钠/2-羟酸-5-磺酸钠/Sodium sulfosalicylate
(R)-(-)-甘油醇缩酮磺基水杨酸/硫柳酸/磺柳酸/5-磺基水杨酸/2-羟基-5-磺酸/5-Sulfosalicylic acid dihydrate
2,4-二氟水杨酸钠/柳酸钠/邻羟酸钠/2-羟酸单钠盐/杨酸钠/Sodium Salicylate
1,4-二溴-2-水杨酸/柳酸/沙利西酸/撒酸/邻羟酸/2-羟酸/Sallcylic acid
Annexin V-EGFP细胞凋亡检测试剂盒哪家好雪旺细胞培养基 规格20mg Mouse Macrophage MigRation Inhibitory Factor ELISA Kit
星形胶质细胞培养基 规格20mg Mouse MIP-5 ELISA Kit
星形胶质细胞培养基 规格20mg Mouse Macrophage Inflammatory Protein-3β,MIP-3β ELISA kit
动物星形胶质细胞培养基 规格20mg Mouse Macrophage Inflammatory Protein-3α,MIP-3α ELISA kit
小胶质细胞培养基 规格20mg Mouse Macrophage Inflammatory Protein-2(MIP-2)ELISA kit
巨噬细胞培养基 规格20mg Mouse Macrophage Inflammatory Protein-1β，MIP-1β ELISA kit
色素细胞培养基 规格20mg Mouse Macrophage Inflammatory Protein-1α,MIP-1α ELISA kit
色素细胞培养基-2（不含TPA） 规格20mg Mouse Macrophage-Derived Chemokine，MDC ELISA kit
成纤维细胞培养基 规格20mg Mouse Macrophage Colony-Stimulating Factor，M-CSF ELISA kit
成纤维细胞培养基-2（用于心肌成纤维细胞） 规格20mg Mouse arginine vasopressin ELISA KIT
肺泡上皮细胞培养基 规格20mg Mouse Ciliary Neurotrophic Factor ELISA Kit
骨骼肌细胞培养基 规格20mg Mouse Haptoglobin ELISA KIT
上皮细胞培养基 规格20mg Mouse connective tissue growth factor ELISA Kit
动物上皮细胞培养基 规格20mg Mouse Desmin ELISA Kit
肾系膜细胞培养基 规格20mg Mouse AmphiregulinELISA Kit
培养操作步骤：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
一、Annexin V-EGFP细胞凋亡检测试剂盒哪家好分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称：Annexin V-EGFP细胞凋亡检测试剂盒哪家好英文名称：Annexin V-EGFP Apoptosis Detection Kit
产品规格：20次|50次
发货周期：1～3天
本试剂盒是用EGFP标记的重组人AnexinV来检测细胞凋亡时出现在细胞膜表面的磷酯酰丝氨酸的一种细胞凋亡检测试剂盒。一个包装的本试剂盒共可以检测20个样品。可以使用流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检测设备进行检测。
试剂盒组份
AnexinV-EGFP—————————100μl
AnexinV-EGFP结合液——————12ml
碘化丙啶染色液—————————220μl
Anexin是一类广泛分布于真核细胞细胞浆内钙离子依赖的磷酯结合蛋白，参与细胞内的信号转导。但仅AnexinV被报道可以调控一些PKC的活性。
AnexinV选择性结合磷酯酰丝氨酸(phosphatidylserine，简称PS)。磷酯酰丝氨酸主要分布在细胞膜内侧，即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期，不同类型的细胞都会把磷酯酰丝氨酸外翻到细胞表面，即细胞膜外侧。磷酯酰丝氨酸暴露到细胞表面后会促进凝血和炎症反应。而AnexinV和外翻到细胞表面的磷酯酰丝氨酸结合后可以阻断磷酯酰丝氨酸的促凝血和促炎症反应活性。
用带有绿色荧光的荧光探针EGFP标记的AnexinV，即AnexinV-EGFP，就可以用流式细胞仪或荧光显微镜非常简单而直接地检测到磷酯酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。
本试剂盒还提供了碘化丙啶染色液，碘化丙啶(PropidiumIodide,PI)可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞，呈现红色荧光。对于坏死细胞，由于细胞膜的完整性已经丧失，AnexinV-EGFP可以进入到细胞浆内，与位于细胞膜内侧的磷酯酰丝氨酸结合，从而也使坏死细胞呈现绿色荧光。
综上所述，用AnexinV-EGFP和碘化丙啶染色后，正常的活细胞不被AnexinV-EGFP和碘化丙啶染色；凋亡早期的细胞仅被AnexinV-EGFP染色，碘化丙啶染色呈阴性；坏死细胞和凋亡晚期的细胞可以同时被AnexinV-EGFP和碘化丙啶染色。
储存条件4℃避光，有效期6个月。
注意事项：
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
以下是公司正在热销产品：
3,5-二叔基-4-羟酸脂磷壁酸/Lipoteichoic acid
2-溴-4-苯二胺四酸三钾盐/EDTA三钾盐二水合物/EDTA-三钾/EDTA-3K
N,N,N-三基二胺二胺四酸二钾盐/二胺四酸钾/EDTA-2K
4-溴-2-氟三苯基磺酸/磺酸/烷磺酸/MSA
N-Boc-4-酸酯啶2--1-磺酸/托拜厄斯酸/2--1-磺酸/2-氨基-1-萘磺酸/脱拜厄斯酸/吐氏酸/2-Naphthylamine-1-sulfonic acid
代肟基酸酯1，5-萘二磺酸钠/1,5-萘二磺酸二钠盐/萘-1,5-二磺酸钠盐/Sodium 1,5-naphthalenedisulfonate dibasic
3,4,5-三硼酸磺基水杨酸钠/磺柳酸钠/2-羟酸-5-磺酸钠/Sodium sulfosalicylate
(R)-(-)-甘油醇缩酮磺基水杨酸/硫柳酸/磺柳酸/5-磺基水杨酸/2-羟基-5-磺酸/5-Sulfosalicylic acid dihydrate
2,4-二氟水杨酸钠/柳酸钠/邻羟酸钠/2-羟酸单钠盐/杨酸钠/Sodium Salicylate
1,4-二溴-2-水杨酸/柳酸/沙利西酸/撒酸/邻羟酸/2-羟酸/Sallcylic acid
Annexin V-EGFP细胞凋亡检测试剂盒哪家好雪旺细胞培养基 规格20mg Mouse Macrophage MigRation Inhibitory Factor ELISA Kit
星形胶质细胞培养基 规格20mg Mouse MIP-5 ELISA Kit
星形胶质细胞培养基 规格20mg Mouse Macrophage Inflammatory Protein-3β,MIP-3β ELISA kit
动物星形胶质细胞培养基 规格20mg Mouse Macrophage Inflammatory Protein-3α,MIP-3α ELISA kit
小胶质细胞培养基 规格20mg Mouse Macrophage Inflammatory Protein-2(MIP-2)ELISA kit
巨噬细胞培养基 规格20mg Mouse Macrophage Inflammatory Protein-1β，MIP-1β ELISA kit
色素细胞培养基 规格20mg Mouse Macrophage Inflammatory Protein-1α,MIP-1α ELISA kit
色素细胞培养基-2（不含TPA） 规格20mg Mouse Macrophage-Derived Chemokine，MDC ELISA kit
成纤维细胞培养基 规格20mg Mouse Macrophage Colony-Stimulating Factor，M-CSF ELISA kit
成纤维细胞培养基-2（用于心肌成纤维细胞） 规格20mg Mouse arginine vasopressin ELISA KIT
肺泡上皮细胞培养基 规格20mg Mouse Ciliary Neurotrophic Factor ELISA Kit
骨骼肌细胞培养基 规格20mg Mouse Haptoglobin ELISA KIT
上皮细胞培养基 规格20mg Mouse connective tissue growth factor ELISA Kit
动物上皮细胞培养基 规格20mg Mouse Desmin ELISA Kit
肾系膜细胞培养基 规格20mg Mouse AmphiregulinELISA Kit
培养操作步骤：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
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文献和实验相关实验
Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸PS有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞胞膜结合，将Annexin V标记上荧光染料利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 由于凋亡晚期或坏死细胞膜完整性丧失，细胞核染色液可进入细胞内染色细胞核，搭配Annexin V使用可将处于不同凋亡时期的细胞区分开。 A．悬浮细胞： 按照实验方案进行凋亡诱导，300 g离心5 min，弃上清，收集细胞，用PBS洗涤细胞一次，轻轻重悬浮细胞并计数。 取1~5 ×
Q：Annexin V 凋亡检测试剂盒的原理是什么？ A：Annexin V 是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸 PS 有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的 PS 与凋亡早期细胞胞膜结合，将 Annexin V 标记荧光染料如 FITC 利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)或 7-AAD 可与双链 DNA 特异性结合，并产生强烈的荧光，正常情况下无法透过细胞膜。由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性，核染料 PI 或 7-AAD
示例： Jurkat细胞用1μM喜树碱(Camptothecin) (左)或未加药 (右)处理4h，FITC-Annexin V/PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒染色后，流式细胞仪荧光检测。 Annexin V-FITC单阳性细胞为早期凋亡细胞，Annexin V-FITC和PI染色双阳性的细胞为坏死细胞或者晚期凋亡。PI单染色阳性位裸核细胞。 实测数据可能会因细胞类型、细胞凋亡情况，检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。 流式检测细胞凋亡的数据分析方法： 1） 选中所有颗粒，将FSC
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