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- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
32
- 英文名：
Western Semi-dry Transfer Buffer
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
1L|10×1L
1．Western半干法转膜液规格用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
中文名称：Western半干法转膜液规格英文名称：Western Semi-dry Transfer Buffer
产品规格：1L|10×1L
发货周期：1～3天
本品可以用于Western时半干法电转膜。本Western半干法转膜液是一种安全无毒的转膜液，没有使用剧毒的甲醇，也没有使用其它的有毒试剂。配制Western半干法转膜液的方法非常便捷，不需要调节pH值。本Western转膜液共1瓶，可以配制1升Western半干转膜液。
注意事项
1.配制好的半干法转膜液可室温或4℃保存。配制好的半干法转膜液长期存放后，如果颜色变成浅棕色或黄褐色，应丢弃。
2.需使用分析纯级别的乙醇或纯度更高的乙醇。
储存条件室温，有效期两年。
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
注意事项：
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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2Amino1,3benzenediol21,3二3163153
3,5DICHLOROSALICYLALDEHYDE3,5二水杨90608
Azoic Diazo Component 14296968
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2MethylDserine2D丝81132447
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Sodium isethionate羟1562001
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(R)()2Amino3methylbutane(R)()3234701332
SOY ISOFLAVONE大豆异黄
DL2AMINOOCTANOIC ACID2105014
Fast Blue BB Salt 含量：≥98% 规格：20mg/支
固蓝RR 含量：≥ 98% 规格：10mg/支
Fast Blue RR salt 含量：≥ 98% 规格：10mg/支
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Fast Green FCF 含量：≥98% 规格：5mg/支
固红TR 含量：≥98% 规格：5mg/支
Fast Red TR 含量：≥98% 规格：10mg/支
菲洛嗪 含量：≥98% 规格：10mg/支
Western半干法转膜液规格DNMBP动力结合蛋白DNMBP抗体大鼠6前列腺素F1a(6ketoPGF1a)ELISA试剂盒58208
DPH2白喉酰生物合成样蛋白2抗体大鼠糖素(Pentosidine)ELISA试剂盒315377
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phosphoVAV1(Tyr174)化鸟苷转换子VAV1抗体大鼠β防御素(βDF)ELISA试剂盒50351
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文献和实验相关专题 在电流的作用下，使蛋白质从胶转移至固相载体(膜)上。膜的选择：印迹中常用的固相材料有NC膜、DBM、DDT、尼龙膜、PVDF等。我们选用PVDF(聚偏二氟乙烯)，其具有更好的蛋白吸附、物理强度，以及具有更好的化学兼容性。 有两种规格：Immobilon-P(0.45um)和Immobilon-PSQ(0.2um for MW A 半干法 即将凝胶夹层组合放在吸有转印缓冲液的滤纸之间，通过滤纸上吸附的缓冲液传导电流，起到转移的效果
没有SDS? zhanghai123 还有1g SDS aileen83 我做western的转膜缓冲液：Tris:3g, Glycine:14.4g,methanol: 200ml. 共1000ml 不知道是否能对你有用 haodanzhang 配制转膜液时，甲醇不宜过早加入。个人认为不用加SDS，因为加入SDS后会有气泡产生。转膜条件我的一般是：300mA, 2h,效果
刚开始做 Western blot 的同学们想必都大多都是研究生，虽然科研经历还不是特别丰富，但情感经历一定都比较丰富吧。同学们想想自己刚谈恋爱的时候，你刚喜欢一个人却还没表白之前，是不是每天都要想尽一切办法了解他 / 她的爱好，他 / 她的习惯，他 / 她每天的路线等等，等你心里有数之后再开始考虑如何表白？做实验也一样，在开始 Western 之前，尽可能多的了解你的目的蛋白，这和谈恋爱一样，这样表白成功的概率才会大大增加。当然，表白失败也很正常，我们之前做的功课只是增加成功的概率而已，并不
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