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        【求助】western 转膜 mark转不上

        丁香园论坛

        9753
        最近做wb时,转膜后mark很淡,几乎没有

        转膜条件:300mA,恒流 45min,分子量大小40kd

        丽春红染膜后,条带很淡

        转膜液配方:Tris 5.8g,甘氨酸2.9g,甲醇200ml/L,补足液体(去离子水)至1000ml

        请高位高手指点
        有图吗?
        没有SDS?
        还有1g SDS
        我做western的转膜缓冲液:Tris:3g, Glycine:14.4g,methanol: 200ml. 共1000ml

        不知道是否能对你有用
        配制转膜液时,甲醇不宜过早加入。个人认为不用加SDS,因为加入SDS后会有气泡产生。转膜条件我的一般是:300mA, 2h,效果很好,你可以试试。希望对您有帮助!
        我们实验室用的电转液配方:

        Tris 20mM 2.4g
        glycine(甘氨酸) 150mM 11.5g
        甲醇(分析纯)20% 200ml
        dd H2O 800ml加至1000ml
        电转条件:200mA 2小时。


        电转液4℃保存,可以重复利用3-4次,每次用前补充点甲醇,每1000ml补充10ml甲醇吧。
        一直这么做,电转很稳定。

         
        转膜缓冲液有问题,我用的转膜液:Tris:3g, 甘氨酸:14.4g,甲醇: 200ml.

        你的转膜时间太短了,我一般用300mA 转一个半小时。
        首先可以肯定的是40kd,300mA转45min是一定能转上的!转膜液也是没有问题的!条带很淡是否是你本身的样品浓度很稀?Mark转不上是否Mark本身有问题!转膜液我们都是这样配,一直没问题的!还有丽春红染色是与你丽春红的浓度和时间有关!

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

        【求助】western 转膜 mark转不上

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