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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
20
- 英文名：
Stbl3 感受态细胞
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海博湖
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
100ul*10
Stbl3 感受态细胞100ul*10培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
产品名称：Stbl3 感受态细胞100ul*10
规格：100ul*10
分类：克隆感受态细胞
保存条件（保质期）： -80℃（6个月）
Stbl3 感受态细胞100ul*10注意事项：
1. 加入 DNA 时体积不应大于感受态体积的 1/10。--
2. 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。
3. 当 DNA 不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。
4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和 DNA 的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个 数量级。 --
6. 对于连接产物转化，转化前乙醇沉淀 DNA 后用适量 TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬产 物，保证 DNA 浓度不超过 100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。
7. 混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时不可用孔径过小的枪头 (普通 200ul 枪头应剪去枪头尖 0.6cm) 避免用
力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
8.电击感受态细胞保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。
小鼠成纤维细胞;φ2柚皮素(标准品)Naringenin质量规格：HPLC≥98.0%,标准品
CTSV Others Human 人 Cathepsin V / Cathepsin L2 人细胞裂解液 (阳性对照) 柚皮素Naringenin质量规格：HPLC>97%
中国仓鼠卵巢细胞K1(亚系克隆);CHO-K1药根碱(标准品)Jatrorrhizine质量规格：HPLC>98.0%,标准品
ULBP2 Others Human 人 ULBP2 / N2DL-2 人细胞裂解液 (阳性对照) 槲皮素 Quercetin dihydrate质量规格：HPLC>85%,二水BR
Ke-3 人肾癌细胞槲皮素(标准品）Quercetin质量规格：HPLC>98.0%,标准品
CXCL16 Protein Rat 重组大鼠 CXCL16 / SR-PSOX 蛋白 (His 标签)代森锌Zineb质量规格：>90%
PC-3(人前列腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 FGFR3 人细胞裂解液 (阳性对照) 雷公藤碱(标准品)Wilforine质量规格：HPLC≥98%，标准品
人结直肠腺癌细胞;SW480 [SW 480;SW-480]新藤黄酸(标准品)Neogambogic acid质量规格：HPLC≥98%，标准品
19. 干细胞系统延龄草苷（标准品）Diosgenin glucoside质量规格：HPLC≥98%，标准品
CM-R040大鼠肝窦内皮细胞完全培养基100mLN-反式-对香豆酰酪胺(标准品)N-p-CouMaroyltyraMine;Paprazine质量规格：HPLC≥98%，标准品
玉米烯酮(>98% (HPLC),BC) Zearalenone from Giberella zeae 质量规格：>98% (HPLC),BC 小鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(vWF)ELISA试剂盒 ，英文名： vWF ELISA Kit
碱式碳酸锌 Zinc carbonate basic 质量规格：BR 小鼠血管抑素(ANG)ELISA试剂盒 ，英文名： ANG ELISA Kit
硬脂酸锌 Zinc distearate 质量规格：BR 小鼠血红蛋白(HB)ELISA试剂盒 ，英文名： HB ELISA Kit
氢氧化锌(>98%,BR) Zinc hydroxide 质量规格：>98%,BR 小鼠血红蛋白(HbCO)ELISA试剂盒 ，英文名： HbCO ELISA Kit
化锌(>98%,BC) Zinc iodide 质量规格：>98%,BC 小鼠血红素氧合酶1(HO1)ELISA试剂盒 ，英文名： HO1 ELISA Kit
锌四水(>98%,BR) Zinc phosphate tetrahydrate 质量规格：>98%,BR 小鼠血红素氧合酶1(HO-1)ELISA试剂盒 ，英文名： HO-1 ELISA Kit
硫化锌(>98%, Ind Grade) Zinc sulfide 质量规格：>98%, Ind Grade 小鼠血红素氧合酶2(HO-2)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
氧化锆(>98%,BC) Zirconium (IV) oxide 质量规格：>98%,BC 小鼠血红素氧合酶2(HO2)ELISA试剂盒 ，英文名： HO2 ELISA Kit
氯氧化锆八水(>98%,BC) Zirconium (IV) oxide chloride octahydrate 质量规格：>98%,BC 小鼠血红素氧合酶2(HO-2)ELISA试剂盒 ，英文名： HO-2 ELISA Kit
氢氧化锆 Zirconium hydroxide hydrate 质量规格：BR 小鼠血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)ELISA检测试剂盒Mousealpha-granularmembraneprotein,GMP-140ELISAKit 96T/48T
Stbl3 感受态细胞100ul*10小鼠血管细胞粘附分子1(VCAM1)ELISA试剂盒 ，英文名： VCAM1 ELISA Kit 震颤真菌毒素(>98%,BC) Verruculogen from Penicillium verruculosum 质量规格：>98%,BC
小鼠血管性血友病因子(vWF)ELISA试剂盒 ，英文名： vWF ELISA Kit 羊毛脂 Wool fat 质量规格：BR
小鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(vWF)ELISA检测试剂盒MousevonWillebrandFactor,vWF 96T/48T 5--4-氯-3-吲哚基-Β-D-葡萄糖醛酸钠盐 X-GLUC, sodium salt 质量规格：>98%,分子生物学级
小鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(vWF)ELISA试剂盒 ，英文名： vWF ELISA Kit 玉米烯酮(>98% (HPLC),BC) Zearalenone from Giberella zeae 质量规格：>98% (HPLC),BC
小鼠血管抑素(ANG)ELISA试剂盒 ，英文名： ANG ELISA Kit 碱式碳酸锌 Zinc carbonate basic 质量规格：BR
小鼠血红蛋白(HB)ELISA试剂盒 ，英文名： HB ELISA Kit 硬脂酸锌 Zinc distearate 质量规格：BR
小鼠血红蛋白(HbCO)ELISA试剂盒 ，英文名： HbCO ELISA Kit 氢氧化锌(>98%,BR) Zinc hydroxide 质量规格：>98%,BR
小鼠血红素氧合酶1(HO1)ELISA试剂盒 ，英文名： HO1 ELISA Kit 化锌(>98%,BC) Zinc iodide 质量规格：>98%,BC
小鼠血红素氧合酶1(HO-1)ELISA试剂盒 ，英文名： HO-1 ELISA Kit 锌四水(>98%,BR) Zinc phosphate tetrahydrate 质量规格：>98%,BR
小鼠血红素氧合酶2(HO-2)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 硫化锌(>98%, Ind Grade) Zinc sulfide 质量规格：>98%, Ind Grade
Stbl3 感受态细胞100ul*10操作说明：
1. 0.1
cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上 5 分钟，待其沥干水分，正置 5 分钟，使乙醇充分挥发，
待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面 0.5 cm 以方便盖上杯盖，冰中静置 5 分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的 XL1-Blue 电击感受态细胞插入冰中 5 分钟，待其融化，加入目的 DNA (质粒或连接产物)并用手EP 管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。 --
A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC19； --
B. 对于连接产物，请用乙醇沉淀 DNA 后加入适量 T 缓冲液 (10mM Tris HCl, pH7.5; 1mM EDTA)重悬，DNA 浓度 不超过 100ng/μl，体积不超过 5μl/50μl 感受态。--
3. 用 200 μl 枪头将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖--。
4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此为 BioRad 电转仪推荐参数，也可按所用电转仪推 荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。--
5. 2 分钟后从冰中取出电击杯，放室温，加入 700 μl 不含抗生素的无菌 S.O.C. 培养基（室温），用 1ml 枪吹吸电击 杯底部数次混匀后，转移到 50ml 离心管（BD Falcon50ml 锥形离心管等），向离心管中补加 S.O.C. 培养基至 5ml。 37℃，225 rpm 复苏 60 分钟。--
6. 5000rpm 离心一分钟收菌，重悬后取 100-200 μl 涂布到含相应抗生素的 S.O.C 平板上（因菌量较大，若全部涂板 请选用直径 15cm 培养皿 2-5 个）。将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养 13-17 小时。
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
产品名称：Stbl3 感受态细胞100ul*10
规格：100ul*10
分类：克隆感受态细胞
保存条件（保质期）： -80℃（6个月）
Stbl3 感受态细胞100ul*10注意事项：
1. 加入 DNA 时体积不应大于感受态体积的 1/10。--
2. 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。
3. 当 DNA 不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。
4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和 DNA 的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个 数量级。 --
6. 对于连接产物转化，转化前乙醇沉淀 DNA 后用适量 TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬产 物，保证 DNA 浓度不超过 100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。
7. 混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时不可用孔径过小的枪头 (普通 200ul 枪头应剪去枪头尖 0.6cm) 避免用
力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
8.电击感受态细胞保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。
小鼠成纤维细胞;φ2柚皮素(标准品)Naringenin质量规格：HPLC≥98.0%,标准品
CTSV Others Human 人 Cathepsin V / Cathepsin L2 人细胞裂解液 (阳性对照) 柚皮素Naringenin质量规格：HPLC>97%
中国仓鼠卵巢细胞K1(亚系克隆);CHO-K1药根碱(标准品)Jatrorrhizine质量规格：HPLC>98.0%,标准品
ULBP2 Others Human 人 ULBP2 / N2DL-2 人细胞裂解液 (阳性对照) 槲皮素 Quercetin dihydrate质量规格：HPLC>85%,二水BR
Ke-3 人肾癌细胞槲皮素(标准品）Quercetin质量规格：HPLC>98.0%,标准品
CXCL16 Protein Rat 重组大鼠 CXCL16 / SR-PSOX 蛋白 (His 标签)代森锌Zineb质量规格：>90%
PC-3(人前列腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 FGFR3 人细胞裂解液 (阳性对照) 雷公藤碱(标准品)Wilforine质量规格：HPLC≥98%，标准品
人结直肠腺癌细胞;SW480 [SW 480;SW-480]新藤黄酸(标准品)Neogambogic acid质量规格：HPLC≥98%，标准品
19. 干细胞系统延龄草苷（标准品）Diosgenin glucoside质量规格：HPLC≥98%，标准品
CM-R040大鼠肝窦内皮细胞完全培养基100mLN-反式-对香豆酰酪胺(标准品)N-p-CouMaroyltyraMine;Paprazine质量规格：HPLC≥98%，标准品
玉米烯酮(>98% (HPLC),BC) Zearalenone from Giberella zeae 质量规格：>98% (HPLC),BC 小鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(vWF)ELISA试剂盒 ，英文名： vWF ELISA Kit
碱式碳酸锌 Zinc carbonate basic 质量规格：BR 小鼠血管抑素(ANG)ELISA试剂盒 ，英文名： ANG ELISA Kit
硬脂酸锌 Zinc distearate 质量规格：BR 小鼠血红蛋白(HB)ELISA试剂盒 ，英文名： HB ELISA Kit
氢氧化锌(>98%,BR) Zinc hydroxide 质量规格：>98%,BR 小鼠血红蛋白(HbCO)ELISA试剂盒 ，英文名： HbCO ELISA Kit
化锌(>98%,BC) Zinc iodide 质量规格：>98%,BC 小鼠血红素氧合酶1(HO1)ELISA试剂盒 ，英文名： HO1 ELISA Kit
锌四水(>98%,BR) Zinc phosphate tetrahydrate 质量规格：>98%,BR 小鼠血红素氧合酶1(HO-1)ELISA试剂盒 ，英文名： HO-1 ELISA Kit
硫化锌(>98%, Ind Grade) Zinc sulfide 质量规格：>98%, Ind Grade 小鼠血红素氧合酶2(HO-2)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
氧化锆(>98%,BC) Zirconium (IV) oxide 质量规格：>98%,BC 小鼠血红素氧合酶2(HO2)ELISA试剂盒 ，英文名： HO2 ELISA Kit
氯氧化锆八水(>98%,BC) Zirconium (IV) oxide chloride octahydrate 质量规格：>98%,BC 小鼠血红素氧合酶2(HO-2)ELISA试剂盒 ，英文名： HO-2 ELISA Kit
氢氧化锆 Zirconium hydroxide hydrate 质量规格：BR 小鼠血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)ELISA检测试剂盒Mousealpha-granularmembraneprotein,GMP-140ELISAKit 96T/48T
Stbl3 感受态细胞100ul*10小鼠血管细胞粘附分子1(VCAM1)ELISA试剂盒 ，英文名： VCAM1 ELISA Kit 震颤真菌毒素(>98%,BC) Verruculogen from Penicillium verruculosum 质量规格：>98%,BC
小鼠血管性血友病因子(vWF)ELISA试剂盒 ，英文名： vWF ELISA Kit 羊毛脂 Wool fat 质量规格：BR
小鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(vWF)ELISA检测试剂盒MousevonWillebrandFactor,vWF 96T/48T 5--4-氯-3-吲哚基-Β-D-葡萄糖醛酸钠盐 X-GLUC, sodium salt 质量规格：>98%,分子生物学级
小鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(vWF)ELISA试剂盒 ，英文名： vWF ELISA Kit 玉米烯酮(>98% (HPLC),BC) Zearalenone from Giberella zeae 质量规格：>98% (HPLC),BC
小鼠血管抑素(ANG)ELISA试剂盒 ，英文名： ANG ELISA Kit 碱式碳酸锌 Zinc carbonate basic 质量规格：BR
小鼠血红蛋白(HB)ELISA试剂盒 ，英文名： HB ELISA Kit 硬脂酸锌 Zinc distearate 质量规格：BR
小鼠血红蛋白(HbCO)ELISA试剂盒 ，英文名： HbCO ELISA Kit 氢氧化锌(>98%,BR) Zinc hydroxide 质量规格：>98%,BR
小鼠血红素氧合酶1(HO1)ELISA试剂盒 ，英文名： HO1 ELISA Kit 化锌(>98%,BC) Zinc iodide 质量规格：>98%,BC
小鼠血红素氧合酶1(HO-1)ELISA试剂盒 ，英文名： HO-1 ELISA Kit 锌四水(>98%,BR) Zinc phosphate tetrahydrate 质量规格：>98%,BR
小鼠血红素氧合酶2(HO-2)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 硫化锌(>98%, Ind Grade) Zinc sulfide 质量规格：>98%, Ind Grade
Stbl3 感受态细胞100ul*10操作说明：
待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面 0.5 cm 以方便盖上杯盖，冰中静置 5 分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的 XL1-Blue 电击感受态细胞插入冰中 5 分钟，待其融化，加入目的 DNA (质粒或连接产物)并用手EP 管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。 --
A. 测定转化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的对照质粒 pUC19； --
B. 对于连接产物，请用乙醇沉淀 DNA 后加入适量 T 缓冲液 (10mM Tris HCl, pH7.5; 1mM EDTA)重悬，DNA 浓度 不超过 100ng/μl，体积不超过 5μl/50μl 感受态。--
3. 用 200 μl 枪头将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖--。
4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此为 BioRad 电转仪推荐参数，也可按所用电转仪推 荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。--
5. 2 分钟后从冰中取出电击杯，放室温，加入 700 μl 不含抗生素的无菌 S.O.C. 培养基（室温），用 1ml 枪吹吸电击 杯底部数次混匀后，转移到 50ml 离心管（BD Falcon50ml 锥形离心管等），向离心管中补加 S.O.C. 培养基至 5ml。 37℃，225 rpm 复苏 60 分钟。--
6. 5000rpm 离心一分钟收菌，重悬后取 100-200 μl 涂布到含相应抗生素的 S.O.C 平板上（因菌量较大，若全部涂板 请选用直径 15cm 培养皿 2-5 个）。将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养 13-17 小时。
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文献和实验相关实验
系列）：高拷贝会导致大片段质粒复制压力大，易丢失或断裂，优先用低拷贝载体（如 pACYC184，拷贝数 10-15）或大片段专用载体（如 BAC 载体 pBeloBAC11，可容纳 100kb 以上片段，在大肠杆菌中稳定存在）； ④选择合适的连接方法，比如 Gibson 组装（无缝克隆）的方法更适合 10-20kb 大片段的连接，相比传统的 T4 连接的方法，成功率更高，操作更简便； ⑤选择重组缺陷型感受态，提高大质粒的转化效率，如 Stbl3、DH10B 等，此外转化方式也会影响转化
Inducible shRNA Lentiviral Vectors
Stbl3™ Competent E. coli Note: You may store the LR reaction at -20° C for up to 1 week before transformation, if desired. 2. Transforming One Shot® Stbl3™ Competent E. coli 1) Thaw, on ice, one vial of One Shot® Stbl3™ chemically
短片段（5kb 以内）的序列克隆成功率。对于提高大片段克隆的成功率，可以从以下几方面考虑： ①选择合适的克隆载体，例如 pCC1-Brick 等适合装载大片段的载体； ②选择合适的克隆方法，通常无缝克隆技术如 Gibson 组装或者 Golden Gate 克隆对于大片段的组装效率更高； ③选择合适的纯化方式，纯化目的基因片段和线性化载体片段后再使用，并且注意两者的使用比例； ④选择合适的大肠杆菌感受态细胞，例如 stbl3，JM109 等； ⑤挑选单克隆菌落时需要注意，成功重组大片段的阳性单克
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