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- Thermo scientific -fermentas
- EK0031
- 2025年10月13日
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| Catalog# | Size, concentration | Supplied with: | Certificate of Analysis | MSDS | ||
| 10X Reaction Buffer A | 10X Reaction Buffer B | 24% PEG Solution | ||||
| EK0031 | 500 u (10 u/µl) | 0.40 ml | 0.20 ml | 0.20 ml | EK0031 | |
| EK0032 | 2500 u (10 u/µl) | 2 x 1.00 ml | 1.00 ml | 1.00 ml | EK0032 | |
| EK0037 | 100 u (10 u/µl) | 0.40 ml | 0.20 ml | 0.20 ml | ||
- Features
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- 在Fermentas公司的限制酶和RT缓冲液中均有活性。
- Applications
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- 核酸5’-末端标记(3, 4)，见图1和操作方法。标记产物用于：
一 杂交探针，
一 转录图谱探针，
一 凝胶电泳分子量标准，
一 DNA测序引物，
一 PCR引物。 - 连接反应前5’-磷酸化修饰寡核苷酸接头、PCR扩增产物、其它DNA或RNA分子。
- [32 P] 后标记分析方法检测DNA修饰(5, 6)。
- 切除3’-磷酸基团(2)。
- PCR引物磷酸化。
- 核酸5’-末端标记(3, 4)，见图1和操作方法。标记产物用于：
该酶也是一种3’-磷酸酶(2)。
酶活性分析混合物：100 mM Tris-HCl (pH 8.0), 10 mM MgCl2 , 5 mM DTT, 0.5 mM 5'-OH DNA, 0.05 mM ATP, 0.1 MBq/ml [gamma-33 P]-ATP.
20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 25 mM KCl, 0.1 mM �DTA, 2 mM DTT和50% (v/v)甘油。
- 抑制剂：金属螯合剂、KCl和NaCl(浓度超过50 �mM时)、磷酸盐、铵离子。
- 失活：75°C加热10分钟或加入EDTA。
备注
- 聚乙二醇(PEG)和亚精胺都会增加磷酸化反应速度和效率(7)。PEG用于置换反应混和物，见操作说明书。
- 铵离子会抑制T4 Polynucleotide Kinase活性，因此磷酸化之前用醋酸钠沉淀DNA (1, 2)。
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