DH10B-Plus 电击感受态细胞50ul*5

同一批感受态细胞，用含目的片段的T载体质粒转化（阳性对照）能长出密密麻麻的菌落，而用另一种载体和目的片段的连接产物转化，却一个菌都没长出来，重复了三次都这样。请问这是感受态细胞的制作不过关，还是连接出了问题？哪个可能性大些？
答：应该是连接的问题。所有连接反应建议同时转化酶切后的质粒作为另一个阴性对照，确定酶切是否完全。同时连接前请确定质粒和片段浓度达到最小连接量的要求。
产品描述：

产品名称	包装	分类
DH10B-Plus 电击感受态细胞50ul*5	50ul*5	克隆感受态细胞

DH10B-Plus 电击感受态细胞50ul*5注意事项：
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。 
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。 
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
SCG2 Protein Human 重组人 SCG2 / Secretogranin II 蛋白 (His 标签)吲哚乙酸酯Indoxyl acetate质量规格：0.97
小鼠腹脊髓神经细胞(MN-vsc)(1×106) lovo, 人结肠癌细胞 Humanα-环糊精α-Cyclodextrin质量规格：>98%,BR
中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);DUKXB11 carrying pDEF202-hTPO-163氧化酶(XOD)Xanthine Oxidase from bovine milk质量规格：BR，>7U/MG, powder
VNN1 Others Mouse 小鼠 VNN1 / Vanin-1 人细胞裂解液 (阳性对照) 酰化酶,L-氨基酰化酶Acylase from Aspergilus sp.质量规格：酶活力≥30000u/g
A2780 卵巢癌胰蛋白酶1:250Trypsin 1:250 fromPorcine pancreas质量规格：>250U/mg,BR
rRTEC, 大鼠肾小管上皮细胞醋酸戈那瑞林Gonadorelin Acetate质量规格：>98%,单醋酸盐
人干细胞因子单克隆抗体细胞株;AMS2(SCF3) 人子宫颈上皮细胞完全培养基 100mL盐酸格拉司琼Granisetron HCl质量规格：>99.0%,BR
人结肠微血管内皮细胞HCoMEC盐酸格拉司琼（标准品）Granisetron HCl质量规格：HPLC>98%,标准品
HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/England/195/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人细胞裂解液 (阳性对照) 氢氯噻嗪Hydrochlorothiazide质量规格：度>99%,AR
KMB 人胚肺成纤维样细胞氢氯噻嗪（标准品）Hydrochlorothiazide质量规格：HPLC>98%,标准品
银杏内酯C(标准品)  Ginkgolide C  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠解整合素金属蛋白酶8(ADAM8)ELISA试剂盒 ，英文名： ADAM8 ELISA Kit
银杏内酯J(标准品)  Ginkgolide J  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠解整合素金属蛋白酶9(ADAM9)ELISA试剂盒 ，英文名： ADAM9 ELISA Kit
隐丹参酮(标准品)  Cryptotanshinone  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠解整合素样金属蛋白酶8(ADAM8)ELISA检测试剂盒MouseADisiegrinAndMetalloprotease8,ADAM8ELISAKit 96T/48T
隐丹参酮  Cryptotanshinone  质量规格：HPLC≥97%，BR 小鼠解整合素样金属蛋白酶8(ADAM8)ELISA试剂盒 ，英文名： ADAM8 ELISA Kit
牛磺鹅去氧胆酸(标准品)  Taurochenodeoxycholic acid  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠解整合素样金属蛋白酶9(ADAM9)ELISA试剂盒 ，英文名： ADAM9 ELISA Kit
隐绿原酸(标准品)  Cryptochlorogenic acid  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠金属硫蛋白1(MT1)ELISA试剂盒 ，英文名： MT1 ELISA Kit
鹰嘴豆芽素A(标准品)  Biochanin A  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠金属硫蛋白1(MT-1)ELISA试剂盒 ，英文名： MT-1 ELISA Kit
鹰嘴豆芽素A  Biochanin A  质量规格：>98%,BR 小鼠金属硫蛋白2(MT-2)ELISA试剂盒 ，英文名： MT-2 ELISA Kit
柚皮苷,川陈皮素  Naringin  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠晶状体蛋白αB(CRYαB)ELISA试剂盒 ，英文名： CRYαB ELISA Kit
羽扇豆醇（标准品）  Lupeol  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠精胺氧化酶(SMOX)ELISA试剂盒 ，英文名： SMOX ELISA Kit
DH10B-Plus 电击感受态细胞50ul*5小鼠睫状神经营养因子(CF)ELISA检测试剂盒MouseCiliaryNeuroophicFactor,CF 96T/48T 淫羊藿素(标准品)  Icaritin  质量规格：HPLC≥98%，标准品
小鼠睫状神经营养因子(CF)ELISA试剂盒 ，英文名： CF ELISA Kit 银杏内酯A(标准品)  Ginkgolide A  质量规格：HPLC≥98%，标准品
小鼠解脲脲原体抗体(UU-Ab)ELISA试剂盒 ，英文名： UU-Ab ELISA Kit 银杏内酯B(标准品)  Ginkgolide B  质量规格：HPLC≥98%，标准品
小鼠解整合素金属蛋白酶8(ADAM8)ELISA试剂盒 ，英文名： ADAM8 ELISA Kit 银杏内酯C(标准品)  Ginkgolide C  质量规格：HPLC≥98%，标准品
小鼠解整合素金属蛋白酶9(ADAM9)ELISA试剂盒 ，英文名： ADAM9 ELISA Kit 银杏内酯J(标准品)  Ginkgolide J  质量规格：HPLC≥98%，标准品
小鼠解整合素样金属蛋白酶8(ADAM8)ELISA检测试剂盒MouseADisiegrinAndMetalloprotease8,ADAM8 96T/48T 隐丹参酮(标准品)  Cryptotanshinone  质量规格：HPLC≥98%，标准品
小鼠解整合素样金属蛋白酶8(ADAM8)ELISA试剂盒 ，英文名： ADAM8 ELISA Kit 隐丹参酮  Cryptotanshinone  质量规格：HPLC≥97%，BR
小鼠解整合素样金属蛋白酶9(ADAM9)ELISA试剂盒 ，英文名： ADAM9 ELISA Kit 牛磺鹅去氧胆酸(标准品)  Taurochenodeoxycholic acid  质量规格：HPLC≥98%，标准品
小鼠金属硫蛋白1(MT1)ELISA试剂盒 ，英文名： MT1 ELISA Kit 隐绿原酸(标准品)  Cryptochlorogenic acid  质量规格：HPLC≥98%，标准品
小鼠金属硫蛋白1(MT-1)ELISA试剂盒 ，英文名： MT-1 ELISA Kit 鹰嘴豆芽素A(标准品)  Biochanin A  质量规格：HPLC≥98%，标准品
DH10B-Plus 电击感受态细胞50ul*5操作方法：
1. DH5α感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15小时。
感受态细胞放到-80冰箱了有半年了，还能用来转化质粒吗？
答：如-80冰箱储存过程中没有发生冻融的情况，是可以用来转化的，但是由于冻存时间过长，转化效率会有所下降，如果用于普通的质粒重转或TA克隆等高效连接体系也是可以的，如珍贵的样品请选用较为新鲜的感受态细胞。