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- 2025年07月08日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
34
- 英文名：
Origami(DE3) 感受态细胞
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海博湖
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
100ul*10
| 产品名称 | 包装 | 分类 |
| Origami(DE3) 感受态细胞100ul*10 | 100ul*10 | 表达感受态细胞 |
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
同一批感受态细胞，用含目的片段的T载体质粒转化（阳性对照）能长出密密麻麻的菌落，而用另一种载体和目的片段的连接产物转化，却一个菌都没长出来，重复了三次都这样。请问这是感受态细胞的制作不过关，还是连接出了问题？哪个可能性大些？
答：应该是连接的问题。所有连接反应建议同时转化酶切后的质粒作为另一个阴性对照，确定酶切是否完全。同时连接前请确定质粒和片段浓度达到最小连接量的要求。
感受态细胞放到-80冰箱了有半年了，还能用来转化质粒吗？
答：如-80冰箱储存过程中没有发生冻融的情况，是可以用来转化的，但是由于冻存时间过长，转化效率会有所下降，如果用于普通的质粒重转或TA克隆等高效连接体系也是可以的，如珍贵的样品请选用较为新鲜的感受态细胞。
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糠酸(>97%，BR) 2-Furoic acid 质量规格：>97%，BR 高干扰血清/血浆二(MDA)比色法定量检测试剂盒50
2-甲基咪唑(>98%,BR) 2-Methylimidazole 质量规格：>98%,BR 高级离心柱DNA回收试剂盒20
6-氯嘌呤(>98%,BR) 6-Chloropurine 质量规格：>98%,BR 高容量细胞荧光筛选技术试剂盒5
Big CHAP(>98%，BR) Big CHAP 质量规格：>98%，BR 高通量远红外细胞免疫筛选技术试剂盒5
C12E8 10%溶液 C12E8 质量规格：BR 高效CHIPDNA分子克隆试剂盒10
氟化钙(>98%,BR) Calcium floride 质量规格：>98%,BR 高效CHIPDNA分子克隆试剂盒10
硬脂酸钙 Calcium stearate 质量规格：BR 高效CHIPDNA分子库构建试剂盒10
香柏油 Cedar wood oil 质量规格：商品级 高效CHIPDNA分子库构建试剂盒10
硫酸铈八水(>97%,BR) Cerium(III) sulfate, octahydrate 质量规格：>97%,BR 高效液相色谱(HPLC)分析20样本
Origami(DE3) 感受态细胞100ul*10高分子蛋白标准样100 司班40 Span* 40 质量规格：BR
高干扰血清/血浆二(MDA)比色法定量检测试剂盒50 盐酸酪胺 Tyramine hydrochloride 质量规格：>97%,BR
高干扰血清/血浆二(MDA)比色法定量检测试剂盒50 糠酸(>97%，BR) 2-Furoic acid 质量规格：>97%，BR
高级离心柱DNA回收试剂盒20 2-甲基咪唑(>98%,BR) 2-Methylimidazole 质量规格：>98%,BR
高容量细胞荧光筛选技术试剂盒5 6-氯嘌呤(>98%,BR) 6-Chloropurine 质量规格：>98%,BR
高通量远红外细胞免疫筛选技术试剂盒5 Big CHAP(>98%，BR) Big CHAP 质量规格：>98%，BR
高效CHIPDNA分子克隆试剂盒10 C12E8 10%溶液 C12E8 质量规格：BR
高效CHIPDNA分子克隆试剂盒10 氟化钙(>98%,BR) Calcium floride 质量规格：>98%,BR
高效CHIPDNA分子库构建试剂盒10 硬脂酸钙 Calcium stearate 质量规格：BR
高效CHIPDNA分子库构建试剂盒10 香柏油 Cedar wood oil 质量规格：商品级
Origami(DE3) 感受态细胞100ul*10操作方法：
1. DH5α感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15小时。
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文献和实验适合 用作初始克隆宿主菌的 K-12 菌株，具有高转化效率、蓝 / 白斑筛选能力（与合适质粒）和导致优质质粒 DNA 高产的 recA endA 突变。由于存在 F 附加体编码的 lacI q 阻遏蛋白， NovaBlue 的 DE3 溶原菌是一个非常有用的严紧型宿主菌。 Origami 为 K-12 衍生的宿主菌，硫氧还蛋白还原酶突变 ( trxB ) 和谷胱甘肽还原酶 ( gor ) 基因均为突变，能够大大增强胞浆内二硫键的形成。研究表明即使总体表达水平相似， Origami
【专题讨论】原核表达秘笈之宿主菌株的选择！（接原原核表达研究者关心的10个问题贴）
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High Level Expression of Recombinant Proteins in E. coli
) plus pRARE Tuner(DE3) lacZY deletion mutant ADA494(DE3) trxB mutant Origami(DE3) trxB and gor mutations Expression Plasmid Elements Origin of Replication (ColE1) Selectable marker (ampicillin, kanamycin or chloramphenicol resistance)
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