EHA101 电击感受态细胞50ul*50

同一批感受态细胞，用含目的片段的T载体质粒转化（阳性对照）能长出密密麻麻的菌落，而用另一种载体和目的片段的连接产物转化，却一个菌都没长出来，重复了三次都这样。请问这是感受态细胞的制作不过关，还是连接出了问题？哪个可能性大些？
答：应该是连接的问题。所有连接反应建议同时转化酶切后的质粒作为另一个阴性对照，确定酶切是否完全。同时连接前请确定质粒和片段浓度达到最小连接量的要求。
产品描述：

产品名称	包装	分类
EHA101 电击感受态细胞50ul*50	50ul*50	根癌农杆菌感受态细胞

EHA101 电击感受态细胞50ul*50注意事项：
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。 
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。 
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
非洲绿猴肾细胞系/HCV-NS5A;Vero-HCV-NS5A盐酸阿比朵尔（标准品）Arbidol HCl质量规格：HPLC>98%,标准品
C6, 大鼠脑胶质瘤细胞阿加曲班Argatroban质量规格：>99%,超,细胞培养级
人癌细胞;MCF 7B 大鼠肺大动脉内皮细胞完全培养基 100mL阿加曲班（标准品）Argatroban质量规格：HPLC>98%,标准品
雪旺氏细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)醋酸精氨酸加压素Argipressin Acetate质量规格：度98%
EFNB2A Others Danio rerio (zebrafish) 斑马鱼 EFNB2A / Ephrin B2a 人细胞裂解液 (阳性对照) 阿替洛尔Atenolol质量规格：度大于98%,USPgrade
人Burkkit淋巴瘤细胞;Daudi 大鼠肾小球内皮细胞完全培养基 100mLPS48PS 48质量规格：>99%,PDK1 activator
MMQ 小鼠垂体瘤细胞阿巴卡韦5'-β-D-葡萄糖苷酸Abacavir 5'-β-D-Glucuronide质量规格：美国进口
FETUB Others Human 人 Fetuin-B / FETUB 人细胞裂解液 (阳性对照) 4-(三氟甲基)烟酰胺4-(Trifluoromethyl)nicotinamide质量规格：美国进口
人非小细胞肺腺癌细胞;NCI-H19751-甲基-烟酰胺化物1-Methyl-nicotinamide Iodide质量规格：美国进口
SLAMF6 Others Human 人 SLAMF6 / Ly108 人细胞裂解液 (阳性对照) 烟酰胺-2,4,5,6-d4Nicotinamide-2,4,5,6-d4质量规格：美国进口
五乙酸儿茶素酯 HPLC≥98% 5mg rabbitiercellularadhesionmolecule2,ICAM-2ELISA试剂盒兔子细胞间粘附分子2(ICAM-2/CD102)ELISA试剂盒规格：96T/48T
五乙酸紫丁香甙酯 HPLC≥98% 5mg rabbitiercellularadhesionmolecule3,ICAM-3ELISA试剂盒兔子细胞间粘附分子3(ICAM-3/CD50)ELISA试剂盒规格：96T/48T
西米杜鹃醇 HPLC≥98% 5mg RabbitIerferonα,IFN-αELISA试剂盒兔子α干扰素(IFN-α)ELISA试剂盒规格：96T/48T
西米杜鹃酮 HPLC≥98% 5mg rabbitIerferonγ,IFN-γELISA试剂盒兔子γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒规格：96T/48T
喜果苷 HPLC≥98% 5mg RabbitIerleukin1,IL-1ELISA试剂盒兔子白介素1(IL-1)ELISA试剂盒规格：96T/48T
细胞松驰素D HPLC≥98% 5mg RabbitIerleukin10,IL-10ELISA试剂盒兔子白介素10(IL-10)ELISA试剂盒规格：96T/48T
细叶桉萜酯 A HPLC≥98% 5mg RabbitIerleukin17,IL-17ELISA试剂盒兔白介素17(IL-17)ELISA试剂盒规格：96T/48T
仙鹤草内酯 HPLC≥98% 5mg RabbitIerleukin1β,IL-1βELISA试剂盒兔子白介素1β(IL-1β)ELISA试剂盒规格：96T/48T
仙鹤草内酯O葡萄糖甙 HPLC≥98% 5mg RabbitIerleukin2,IL-2ELISA试剂盒兔子白介素2(IL-2)ELISA试剂盒规格：96T/48T
腺华素 HPLC≥98% 5mg RabbitIerleukin3,IL-3ELISA试剂盒兔子白介素3(IL-3)ELISA试剂盒规格：96T/48T
EHA101 电击感受态细胞50ul*50rabbitiercellularadhesionmolecule1,ICAM-1/CD54ELISA试剂盒兔子细胞间粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA试剂盒规格：96T/48T 五味子脂素 M HPLC≥98% 5mg
rabbitiercellularadhesionmolecule2,ICAM-2ELISA试剂盒兔子细胞间粘附分子2(ICAM-2/CD102)ELISA试剂盒规格：96T/48T 五乙酸儿茶素酯 HPLC≥98% 5mg
rabbitiercellularadhesionmolecule3,ICAM-3ELISA试剂盒兔子细胞间粘附分子3(ICAM-3/CD50)ELISA试剂盒规格：96T/48T 五乙酸紫丁香甙酯 HPLC≥98% 5mg
RabbitIerferonα,IFN-αELISA试剂盒兔子α干扰素(IFN-α)ELISA试剂盒规格：96T/48T 西米杜鹃醇 HPLC≥98% 5mg
rabbitIerferonγ,IFN-γELISA试剂盒兔子γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒规格：96T/48T 西米杜鹃酮 HPLC≥98% 5mg
RabbitIerleukin1,IL-1ELISA试剂盒兔子白介素1(IL-1)ELISA试剂盒规格：96T/48T 喜果苷 HPLC≥98% 5mg
RabbitIerleukin10,IL-10ELISA试剂盒兔子白介素10(IL-10)ELISA试剂盒规格：96T/48T 细胞松驰素D HPLC≥98% 5mg
RabbitIerleukin17,IL-17ELISA试剂盒兔白介素17(IL-17)ELISA试剂盒规格：96T/48T 细叶桉萜酯 A HPLC≥98% 5mg
RabbitIerleukin1β,IL-1βELISA试剂盒兔子白介素1β(IL-1β)ELISA试剂盒规格：96T/48T 仙鹤草内酯 HPLC≥98% 5mg
RabbitIerleukin2,IL-2ELISA试剂盒兔子白介素2(IL-2)ELISA试剂盒规格：96T/48T 仙鹤草内酯O葡萄糖甙 HPLC≥98% 5mg
EHA101 电击感受态细胞50ul*50操作方法：
1. DH5α感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15小时。
感受态细胞放到-80冰箱了有半年了，还能用来转化质粒吗？
答：如-80冰箱储存过程中没有发生冻融的情况，是可以用来转化的，但是由于冻存时间过长，转化效率会有所下降，如果用于普通的质粒重转或TA克隆等高效连接体系也是可以的，如珍贵的样品请选用较为新鲜的感受态细胞。