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- 2025年07月09日
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技术概况：提供TUNEL染色服务，并对染色后结果进行显微照相。
服务描述：
原位末端凋亡检测(TUNEL)是一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。对于待检测的细胞或组织样品，经过生物素标记和后续的DAB显色等步骤，即可在普通光学显微镜下观察到凋亡细胞。
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文献和实验一、DNA聚合酶或Klenow大片段介导的原位缺口平移（ISNT） 1．切片常规脱蜡，梯度乙醇复水化。 2．将切片组织浸入2×SSC液中，80℃，20min，然后蒸馏水冲尽。 3．0.5％胃蛋白酶（pH2.0）37℃消化0～20min，PBS洗尽。 4．用滤纸擦干组织块周边液体放入湿盒组织切片上滴加缓冲液A，5min。缓冲液A：50mmol/L Tris-HCl, 5mmol/L MgCl2, 10mmol/L β-巯基乙醇，0.005％BSA，pH7.5。 5．弃
（一）原理 凋亡细胞是由于内源性核酸内切酶的激活后，将DNA 切割成许多双链DNA 片段以及高分子量DNA 单链断裂点（缺口），暴露出大量3- 羟基末端，如用末端脱氧核苷酸转移酶（TdT ）将标记的dUTP 进行缺口末端标记，则可原位特异地显示出凋亡细胞。主要应用的是荧光标记法和酶标记法。 （二）荧光标记法 1 ．材料与试剂 采用德国Boehringer-Mannheim 公司In Situ Cell
ziweihua 求助高人啊，我想用斑马鱼整体胚胎检测其细胞凋亡情况，选用的Roche的in situ cell death detection kit, POD. 按照其中的贴壁细胞或细胞涂片的方法做了两遍，可是连阳性对照都没有信号。后来查找到一篇论文中的方法，如下： a，收集胚胎后用PBS清洗，转移到1.5ml的EP管内，4%多聚甲醛PBS固定过 夜 b，用PBS配制 25%50%75%的梯度酒精，每次5min将胚胎梯度脱水。
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