原位末端凋亡法（Tunel）实验技术（威斯腾生物-中关村生物

简介：

TUNEL 技术, 即脱氧核苷酸末端转移酶( Term inal2deoxynucleo t idyl t ran sferase, TdT )介导的x2dU TP 缺口末端标记(TdT 2m ediatedx2dU TP n ick end labeling, TUN EL ) 技术, 是目前原位检测细胞凋亡最敏感、快速、特异的新方法, 已广泛用于生物、医学研究领域。

TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL)是一种用来检测细胞凋亡(apoptosis)的分析方法.细胞凋亡有一项重要的特征为细胞内的DNA会碎裂成片段(DNA fragmentation),TUNEL可以有效的去探测DNA片段的产生,所以可以传达细胞凋亡的讯息.TdT为terminal deoxynucleotidyl transferase,此种酵素可以在没有DNA模板的情形下,连结核甘酸到DNA的3'-OH处.1992年,以色列科学家Gavrieli等人将TdT引为为标定DNA片段的一个酵素,自此衍生出TUNEL此项技术.TUNEL的好处是可以在细胞凋亡发生的早期,即可侦测到DNA片段的产生,并且可以直接使用在组织切片上,观察细胞凋亡发生的位置.所以TUNEL目前为广泛接受与使用的一种细胞凋亡的分析方法.

[试剂]

1．TUNEL试剂盒：购自罗氏公司

2．DAB：Sigma

3．PBS和TBS缓冲液：国药集团

[仪器]

切片机：德国Leica，RM2145型

展片机：德国Leica，HI1210型

烤片机：德国Leica，HI1220型

[操作流程]

• 石蜡切片，常规脱蜡至水; 石蜡切片4um贴在涂有切片粘合剂的载玻片上，58。C烤24h，常规脱蜡至水，二甲苯Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ 各10分钟，无水乙醇，95%，85%，75%乙醇，各2分钟，水洗2分钟。
• 0.3%H2O2作用 30min,室温，PBS洗3min×3次；
• Proteinase K 20ug/ml 37℃ 20min
• PBS洗3min×3次；
• 0.1%Triton×100 PBS洗3min×3次；
• PBS洗3min×3次；
• TUNEL混合液---1ml Tunel缓冲液中加入10ul b-11-DUTP, 10ul TDT, 37C 1h,室温1h
• PBS洗3min×3次；
• Streptavidin-HRP 1:400 37C 30min

10．PBS洗3min×3次；

11．0.04%DAB+0.03%H2O2显色10min，流水洗

12．Hematoxylin衬染1min，盐酸乙醇分化，水洗

13．常规树脂封片

[结果]

阳性结果为棕黄色（核）或棕褐色，背景呈紫蓝色。

我中心开展这项技术已有10余年，工作人员有丰富的经验，为广大的科研朋友在Tunel实验中提供了帮助，为他们争取了宝贵的科研时间。

Tunel（原位末端凋亡法）技术服务

A、实验条件： 切片机(石蜡和冰冻)、Tunel试剂盒（罗氏）

B、交货时间： 15－20天

C、结果提供： 正常和阳性对照玻片及其1张数码照片，剩余石蜡块，检测报告

D、客户提供： 样本

E、样本要求：取材保持组织新鲜（组织块以小于2cm*1.5cm*0.3cm为宜），立即放入固定液（固定液用10%福尔马林液或4%potassium dichromate缓冲液，体积为组织块的10倍以上）中，避免干燥；对于有血迹的样本，可用PBS液或生理盐水冲洗后直接放入固定液中；经固定后的样本必须在48小时内处理

（威斯腾生物--原代培养、细胞敲除、模式动物一站式科研服务！）

实验服务流程

威斯腾生物服务项目

分子生物学类	蛋白质与免疫学	动物实验
实时荧光定量PCR	单克隆抗体制备	帕金森疾病模型
免疫共沉淀（Co-IP）	多克隆抗体制备	抑郁症动物模型
ELISA（酶联免疫吸附法）技术	Western-blot 实验服务	脊髓损伤模型
生化指标检测	蛋白双向电泳实验服务	脑外损伤模型
双荧光素酶报告基因检测	原核蛋白表达纯化	骨神经损伤模型
染色质免疫共沉淀（ChIP）	真核蛋白表达纯化	心肌缺血模型
GST pull Down	ITRAQ定量蛋白质组学	心力衰竭模型
	SLAC蛋白组学	肺动脉高血压动物模型
		高血压模型
病毒类	实验课题整体外包	粥样动脉硬化模型
过表达/干扰慢病毒包装纯化	整体课题外包	大脑中动脉阻塞模型
过表达/干扰腺病毒包装纯化	细胞整体实验外包	慢性之气管炎模型
逆转录病毒包装纯化	动物整体实验外包	过敏性哮喘模型
腺相关病毒包装纯化		肺炎大鼠模型
		肝炎-肝硬化-肝癌模型
蛋白芯片	原代细胞培养	肝纤维化模型
细胞因子芯片	骨髓间充质干细胞培养	胆结石模型
生长因子芯片	脂肪干细胞培养	急性胰腺炎模型
信号通路磷酸化水平检测芯片	心肌成纤维细胞培养	急性肾衰竭模型
BioPlex悬浮芯片	软骨细胞培养	体内血栓模型
生长因子芯片	血管内皮细胞培养	关节炎模型
炎症因子芯片	神经元细胞培养	I型和II型糖尿病模型
血管生成因子芯片	内皮组细胞原代培养	裸鼠成瘤
凋亡因子芯片		基因编辑动物
趋化因子芯片	电生理相关服务	动物整体实验服务
HuProt TM 20K人类蛋白组芯片	膜片钳实验
细胞生物学	高通量测序	代谢组学
细胞原代培养	mRNA测序	气相色谱GC/MS
MTT检测	LncRNA测序	液相色谱LC/MS
细胞凋亡检测	全基因组测序	核磁共震NMR
细胞周期检测	RNA-Seq测序
细胞克隆形成实验	外显子测序	影像学相关实验
Transwell细胞迁移/侵袭	16s扩增子测序	Micro-CT
流式分选	Small RNA测序	小动物活体成像
CCK8/XTT检测	宏基因组测序	核磁共振
台盼蓝检测细胞活性	单细胞测序	PET-CT
药物筛选细胞学实验	circleRNA测序
细胞粘附性检测	甲基化测序	基因编辑动物
细胞划痕实验		条件性敲除小鼠/大鼠
细胞生物学整体实验		全基因敲除小鼠/大鼠
细胞成管实验
病理类	CRISPR/Cas9细胞敲除/敲入	基因芯片
扫描电镜	基因定点突变细胞系	LncRNA芯片
透射电镜	单基因敲除细胞系	miRNA芯片
HE染色	多基因敲除细胞系	mRNA芯片
免疫组化	目的基因敲入细胞系	甲基化芯片（限人和小鼠来源样本）
Tunel（原位末端凋亡法）检测	报告基因敲入细胞系	SNP芯片（限人和小鼠来源样本）
激光共聚焦	miRNA/LncRNA敲除细胞系
免疫荧光
Masson染色	CRISPR/Cas9动物敲除/敲入	科研方案设计与SCI相关服务
原位杂交	基因敲除大鼠/小鼠	科研文献论著翻译
荧光原位杂交	基因敲入大鼠/小鼠	SCI论文翻译润色服务
特殊染色（PSA、茜素红、阿尔新蓝等）		临床实验/科研实验设计方案指导
行为学检测	药物筛选服务项目	药效学评价
水迷宫实验	高通量自动药物筛选平台	神经系统药物药效学评价
旷场实验	细胞高内涵药物筛选平台	抗肿瘤药物药效学评价
重复性刻板行为检测	蛋白质组学靶标研发平台	心血管系统药物药效学评价
动物跑台检测	分子药理研究平台	泌尿系统药物药效学评价
强迫游泳	生物膜片钳药物筛选平台	内分泌系统药物药效学评价
	常规药物体外筛选	抗炎免疫药物药效学评价

【本平台合作项目】
分子生物学、细胞生物学、基因敲出/入、模式动物、SPF动物保种、病理学检测、免疫学检测、影像学检测、原代培养、细胞药筛、CRISPR/Cas9基因编辑、基因芯片、高通量测序、蛋白组学、代谢组学、高通量高内涵筛选、药效学评价、药理毒理学实验、慢病毒包装与稳转株建立、SiRNA与纳米载药、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务！