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石蜡/冰冻切片TUNEL凋亡荧光

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  • 石蜡/冰冻切片TUNEL凋亡荧光
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      晶莱生物

    • 服务名称：

      石蜡/冰冻切片TUNEL凋亡荧光

    • 规格：

      切片

    TUNEL凋亡荧光实验原理
    dUTP 缺口末端标记（TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling，TUNEL ）法检测细胞凋亡的原理是当细胞发生凋亡时，DNA内切酶被激活，核小体间的基因组DNA被切断，暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT）加上带有荧光素FITC标记的dUTP，从而可以通过荧光显微镜进行检测。
     
    TUNEL凋亡荧光实验意义
    1.TUNEL法是一种分子生物学与形态学相结合的研究方法，可对完整的单个凋亡细胞或者凋亡小体进行原位染色，可以准确反映细胞凋亡最典型的生物化学和形态特征。
    2.可用于石蜡切片、冰冻切片、培养的细胞等进行细胞凋亡检测，灵敏度远比一般的组织化学和生物化学方法要高。
    3.操作简便快捷，在细胞凋亡的研究中被广泛采用。
     
    TUNEL凋亡荧光实验步骤：
    1.石蜡切片TUNEL显色法：
    ①石蜡切片常规脱蜡至水，脱蜡剂二甲苯，至水剂乙醇；
    ②PBS漂洗3×5 min；
    ③加入蛋白酶K工作液37℃反应15-30 min, PBS漂洗3×5 min；
    ④4%多.聚.甲.醛（pH7.4的PBS）室温固定15-30 min，PBS漂洗3×5 min；
    ⑤浸入封闭液（3%H2O2）室温封闭10 min，PBS漂洗3×5 min；
    ⑥参考使用试剂盒的说明书配制适量的TUNEL检测液，其中含有TdT酶、荧光标记液、TUNEL检测液；
    ⑦样品上加入适量TUNEL检测液，37℃避光孵育60 min，PBS漂洗3×5 min；
    ⑧选择是否用DAPI复染细胞核；
    ⑨使用抗荧光淬灭封片液封片后在荧光显微镜下进行观察。
     
    2.冰冻切片TUNEL显色法：
    ①新鲜组织经处理后，立即在恒冷冰冻切片机内切片，厚度为5~6 μm；
    ②防脱玻片，贴片，室温阴干约12 h；③4%多.聚.甲.醛（pH7.4的PBS）室温固定10 min，PBS漂洗3×5 min；
    ④浸入封闭液（3%H2O2）室温封闭10 min，PBS漂洗3×5 min；
    ⑤浸入通透液（0.1%Triton X-100溶于PBS中），室温通透30 S-2 min；
    ⑥参考使用试剂盒的说明书配制适量的TUNEL检测液，其中含有TdT酶、荧光标记液、TUNEL检测液；
    ⑦样品上加入适量TUNEL检测液，37℃避光孵育60 min，PBS漂洗3×5 min；
    ⑧选择是否用DAPI复染细胞核；
    ⑨使用抗荧光淬灭封片液封片后在荧光显微镜下进行观察。
     
    结果展示
     
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    实验完成周期及交付标准
    1. 实验周期：1-2周
    2. 交付标准：蜡块、切片、染色图片、实验报告（实验步骤、试剂、耗材等）
     
    需确认的信息
    1. 样本的种属
    2. 样本的类型（固定的组织or蜡块or切片）
    3. 是否提供试剂盒
    4. 拍照要求
     
    参考文献
    [1] Kim Y H , Jung J C , Jung S Y , et al. Comparison of the Efficacy of Fluorometholone With and Without Benzalkonium Chloride in Ocular Surface Disease[J]. Cornea, 2016, 35(2):234-242.
    [2] Qiu W , Wei R , Zhang C , et al. A glycine site-specific NMDA receptor antagonist protects retina ganglion cells from ischemic injury by modulating apoptotic cascades.[J]. Journal of Cellular Physiology, 2010, 223(3):819-826.
     

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    [1] Kim Y H , Jung J C , Jung S Y , et al. Comparison of the Efficacy of Fluorometholone With and Without Benzalkonium Chloride in Ocular Surface Disease[J]. Cornea, 2016, 35(2):234-242.
    [2] Qiu W , Wei R , Zhang C , et al. A glycine site-specific NMDA receptor antagonist protects retina ganglion cells from ischemic injury by modulating apoptotic cascades.[J]. Journal of Cellular Physiology, 2010, 223(3):819-826.
    相关实验

    • 关于细胞凋亡的讨论

      ，但是对组织切片是无法检测的，但是对还没做成组织切片的石蜡标本可以制成单细胞悬液来进行流式检测，但是过程比较复杂，不好制备，因此，不提倡用。因此，检测石蜡包埋的组织切片最好的办法还是TUNEL法，还可以结合HE染色观察调亡细胞形态学改变，再结合免疫组化检测Fas、Bcl-2等调亡基因的蛋白表达来解释其调亡机理，已经足够了， tjbone：采用免疫荧光检测Fas、Bcl-2等凋亡的细胞也是可行的方法。 DEVELOPING A NEW METHOD FOR DETECTING ISLET

    • 【求助】凋亡的问题？

      ）合并使用，来区分凋亡细胞与死亡细胞。此试剂盒可用于流式细胞仪和组织切片染色。 zhaohu552211 谢谢大家！我做的是大鼠的肝脏，样品冻存在-80度，现在想做Tunel的试剂盒和DNA Ladder ，目的是检测凋亡，选择那家的试剂盒比较好呢？现在先不说钱的问题！再次感谢大家的好心！ wanglinling TUN EL 技术, 即脱氧核苷酸末端转移酶( Term inal2deoxynucleo t idyl t ran sferase, TdT )介导的x2dU TP 缺口末端

    • 【求助】斑马鱼原位细胞凋亡检测怎么做啊？

      等等。你首先应该看看你选择的POD试剂盒是否满足你的需求（比如凋亡处在什么阶段）。 另外，看看试剂盒的说明书，例如，有的提示：“有些类型的凋亡性细胞死亡缺乏DNA断裂或DNA裂解不完全，以及细胞外的矩阵成分阻止TdT进入胞内反应，进而产生假阴性结果。”导致TUNEL测定得不到结果。 maggie116 我也做了这个实验，发现整个斑马鱼都是荧光氯 sdxqsjf 我觉得你的实验方法上没有问题，我也用过ROCHE的试剂

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