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TUNEL凋亡

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  • 石蜡/冰冻切片TUNEL凋亡实验服务
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  • 2026年01月06日
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      晶莱生物

    • 服务名称：

      石蜡/冰冻切片TUNEL凋亡实验服务

    • 规格：

      样本

    TUNEL凋亡显色法
    TUNEL（TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling）法检测细胞凋亡的原理是当细胞发生凋亡时，DNA内切酶被激活，核小体间的基因组DNA被切断，暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT）加上带有生物素（Biotin）标记的dUTP即Biotin-dUTP,随后于辣根过氧化物酶（HRP）标记的streptavidin结合，在HRP的催化下通过DAB显色来显示凋亡细胞，从而可以通过普通光学显微镜检测到细胞凋亡。
     
    实验意义
    1. TUNEL法是一种分子生物学与形态学相结合的研究方法，可对完整的单个凋亡细胞或者凋亡小体进行原位染色，可以准确反映细胞凋亡最典型的生物化学和形态特征。
    2. 可用于石蜡切片、冰冻切片、培养的细胞等进行细胞凋亡检测，灵敏度远比一般的组织化学和生物化学方法要高。
    3. 操作简便快捷，在细胞凋亡的研究中被广泛采用。
     
    实验步骤
    1.石蜡切片TUNEL显色法：
    ①石蜡切片常规脱蜡至水，脱蜡剂二甲苯，至水剂乙醇；
    ②PBS漂洗3×5 min；
    ③加入蛋白酶K工作液37℃反应15-30 min, PBS漂洗3×5 min；
    ④4%多.聚.甲.醛（pH7.4的PBS）室温固定15-30 min，PBS漂洗3×5 min；
    ⑤浸入封闭液（3%H2O2）室温封闭10 min，PBS漂洗3×5 min；
    ⑥加入适量TdT酶反应液，暗湿盒中37℃反应1 h，用SSC室温15 min终止反应后,PBS漂洗3×5 min；
    ⑦浸入0.3% H2O2封闭内源性过氧化物酶活性，室温孵育3-5 min，PBS漂洗3×5 min；
    ⑧滴加Streptavidin-HRP工作液，37℃反应30-60 min，PBS漂洗3×5 min；
    ⑨滴加DAB显色液后用去离子水漂洗数次；
    ⑩选择是否用DAPI复染细胞核；
    ?脱水、透明、中性树胶封片后进行观察。
     
    2.冰冻切片TUNEL显色法：
    ①新鲜组织经处理后，立即在恒冷冰冻切片机内切片，厚度为5~6 μm；
    ②防脱玻片，贴片，室温阴干约12 h；
    ③4%多.聚.甲.醛（pH7.4的PBS）室温固定10 min，PBS漂洗3×5 min；
    ④浸入封闭液（3%H2O2）室温封闭10 min，PBS漂洗3×5 min；
    ⑤浸入通透液（0.1%Triton X-100溶于PBS中），室温通透30 S-2 min；
    ⑥加入适量TdT酶反应液，暗湿盒中37℃反应1 h，用SSC室温15 min终止反应后,PBS漂洗3×5 min；
    ⑦浸入0.3% H2O2封闭内源性过氧化物酶活性，室温孵育3-5 min，PBS漂洗3×5 min；
    ⑧滴加Streptavidin-HRP工作液，37℃反应30-60 min，PBS漂洗3×5 min；
    ⑨滴加DAB显色液后用去离子水漂洗数次；
    ⑩选择是否用DAPI复染细胞核；
    ?脱水、透明、中性树胶封片后进行观察。
     
    结果展示

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    实验完成周期及交付标准
    1. 实验周期：1-2周
    2. 交付标准：蜡块、切片、染色图片、实验报告（实验步骤、试剂、耗材等）
     
    需确认的信息
    1. 样本的种属
    2. 样本的类型（固定的组织or蜡块or切片）
    3. 是否提供试剂盒
    4. 拍照要求
     
    参考文献
    [1] Bing L , Ying-Jie X , Xian-Ming C , et al. Molecular mechanism of inhibitory effects of CD59 gene on atherosclerosis in ApoE (-/-) mice[J]. Immunology Letters, 2013, 156(1-2):68-81.
    [2] Ozimati A A . Immunodetection of Smad-4 in developing molar roots of alendronate-treated rats[J]. Archives of Oral Biology, 2013, 58(11):1744-1750.

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    [1] Bing L , Ying-Jie X , Xian-Ming C , et al. Molecular mechanism of inhibitory effects of CD59 gene on atherosclerosis in ApoE (-/-) mice[J]. Immunology Letters, 2013, 156(1-2):68-81.
    [2] Ozimati A A . Immunodetection of Smad-4 in developing molar roots of alendronate-treated rats[J]. Archives of Oral Biology, 2013, 58(11):1744-1750.
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    • TUNEL 检测细胞凋亡原则及经验总结

      一、TUNEL法的实验原理 细胞发生凋亡时, 染色体DNA双链或单链断裂产生大量的粘性3'-OH末端，可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用下，将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3'-末端，从而可进行凋亡细胞的检测，这类方法称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal -deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL)。由于正常的或正在增殖

    • 【求助】TUNEL检测不到凋亡的原因有哪些？

      roy2929 小弟新手 实验等等都不怎么懂，希望高手们帮忙。 做TUNEL检测凋亡，除了本身没有发生凋亡和实验操作原因，还有什么可能会没有信号？比如通过其他不能用TUNEL检测到的方式发生了凋亡？ 不胜感激 qwer_214 TUNEL是一种很特异的检测凋亡的方式，它主要检测DNA特异性的断裂，恕我资历比较浅，我到目前还没有发现其他用TUNEL检测到的方式发生了凋亡。 roy2929

    • TUNEL 法检测细胞凋亡经验总结

      用了许多方法检测小鼠的肝脏、脑部、睾丸等组织的细胞凋亡，其中 TUNEL 法做的最多，我购买的试剂盒主要是 roche、 promega 公司，结果大多数成功，偶尔也有失败，下面我把实验中的关键问题与大家共享一下，同时也希望能对初学者有所帮忙。 TUNEL 法的实验原理 基本原理：对不同组织切片先增加细胞膜通透性，然后让 rTDT 和生物标记的 dTUTP 进入细胞内，在 rTDT 的辅助下 dTUTP 与核断裂的 DNA 3』-OH 结合，再用 HRP 标记的链霉

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