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- 2025年07月16日
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上海派致生物科技有限公司
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基于CRISPR/Cas9技术基因点突变细胞系定制
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基于CRISPR/Cas9技术基因点突变细胞系定制
技术简介
通过sgRNA引导Cas9核酸酶切割基因组目的序列导致DNA双链断裂（Double-strand breaks, DSB），同时以包含点突变的同源序列为模版，通过同源重组修复（Homology directed repair，HDR）的方式对目的位点进行点突变，从而获得基因组DNA指定位点引入点突变的细胞系。技术优势
经过多步优化的CRISPR/Cas9系统，适用于更广泛的哺乳动物细胞，提高了编辑率高，同时大大降低了脱靶效应。实验流程
方案选择
| 方案 | 优缺点 | 适用类型 |
| CRISPR同源重组 | 1、方法成熟稳定，无gRNA设计限制 2、不适合难转染细胞 |
1、编码基因外显子内点突变，不去荧光标记 2、不能满足BE和PE系统设计规则的点突变 3、细胞易转染 |
| Base Editor（BE)系统 | 1、效率高 2、突变位点需在最适编辑窗内 |
1、有点突变类型限制，适用较少部分满足条件的点突变 2、难转染细胞 |
| Prime Editor(PE)系统 | 1、不受点突变类型限制 2、不同细胞中效率有差异 |
1、难转染细胞 2、BE系统和CRISPR同源重组方法都不适用的情况 |
服务标准
客户提供：1. 目的基因ID及突变位点信息；
2. 目的细胞（可选择由派致代购）；
3. 完全培养基1-2 L（派致提供DMEM及1640常规培养基）。
派致交付：按指定方案构建的细胞系及项目报告。
交付周期：14-35周，具体时间取决于靶点复杂程度、细胞类型及生长情况。
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文献和实验组敲除筛选。点突变项目若在前期需要确认靶点是否为必需基因，文库筛选是高效的预判手段。 CRISPR-Pool SAM 文库：激活筛选文库，可作为点突变表型的反向验证手段。 稳定细胞株构建服务 点突变细胞株构建包含：突变类型评估与路线选择（碱基编辑 / 先导编辑 / HDR）、gRNA 与供体模板设计（含防再切割同义突变）、递送方案优化、PCR-RFLP 或 ddPCR 初筛、单克隆筛选与扩增子 NGS 确认，最终交付细胞株及完整基因型与功能验证报告。 --- 五、常见问题FAQ 碱基编辑的窗口位置
【求助】如何通过基因多态性位点预测可以与该SNP点结合的microRNA呢
俊桃桃 想问问，有没有一些预测网站。通过某些基因3'UTR区的rs位点预测出与该点相结合的microRNA呢？谢谢 lide658 目前好像没有这样的网站，所以你只有先确定靶基因然后与其结合的microRNA位点是否存在多态，而且一般要求SNP位于microRNA的种子序列中最好。 俊桃桃 谢谢你，我是已经靶基因（通过文献查到的）不是通过软件预测的。但是我怎么知道他和microRNA结合
【求助】弱弱的问一下 真核生物基因序列在转录起始点之后翻译起始点之前的序列称作什么？
xiaoxiaoyu0329 查了很多资料都没有查出来，请您赐教，谢谢 bigbang_0_0 帮顶：） jiajin 叫5'UTR，5'非翻译区 song333 5' Un-Translated Region pro2004 5'UTR xiaoxiaoyu0329 好的 谢谢
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