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细胞能量代谢OCR/ECAR
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样
百致生物-seahorse细胞代谢分析服务
一、首先是细胞耗氧量(OCR)的检测
在加oligo之前显示的数值,代表的是细胞的基础耗氧量,包括线粒体氧化磷酸化及质子漏耗氧。即质子在线粒体膜通过呼吸链形成电势能后,一部分质子回流可以通过ATP合酶形成ATP,将势能转化为ATP中的能量。一部分通过线粒体膜但是只是发生氧化,势能转化为热量,但是没有用于合成ATP。oligo是ATP合酶抑制剂,加入此药后减少的耗氧代表的是机体用于ATP合成的耗氧量,间接显示此时细胞的ATP产量。FCCP是一种解偶联剂,作为一种质子载体使得大量质子回流,大量耗氧,但是这种质子回流不能形成ATP,FCCP后耗氧的增加,代表线粒体的最大耗氧能力,间接显示最大的呼吸能力,而其相对与基础值的高值代表其还具有的呼吸潜力。
二、细胞的胞外产酸能力(ECAR)间接显示糖酵解能力
基础值代笔的是细胞的非糖酵解产酸值,加入葡糖糖后代表的是此时细胞的糖酵解能力,而加入oligo后,氧化磷酸化被抑制,此时细胞完全靠糖酵解供氧,此时产酸增加,增加值代表细胞的还具有的糖酵解能力即潜力,总的数值代表细胞的最大糖酵解能力,最后加的是糖酵解抑制剂,此药之后的数值表明完全是由糖酵解之外的机理产酸所致的。
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文献和实验了恶性表型。 代谢组学、蛋白质组学以及 ECAR 和 OCR 测试揭示了 ADPGK 显著加速了 PCa 的糖酵解。 ADPGK 与丙酮酸激酶 C(ALDOC)结合,通过 AMP 激活蛋白激酶(AMPK)磷酸化促进糖酵解。 图 2 用于 ADPGK 过表达的慢病毒结构示意图及 ADPGK 过表达结果。 案例 2:用慢病毒载体递送 RNA 干扰工具,研究脯氨酸羟化酶结构域蛋白在调节心肌细胞钙水平中的功能[2] 由于高氧消耗,心肌细胞对环境中的氧气极为敏感。脯氨酸羟化酶结构域蛋白 2(PHD
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