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- 通过慢病毒或PB转座酶方法构建外源基因稳定表达的细胞株/系
- 上海
- 2025年07月15日
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上海派致生物科技有限公司
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稳定转染细胞株（稳转株）定制
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稳定转染细胞株（稳转株）定制
技术简介
稳定转染细胞株，即稳转细胞株，该技术已广泛应用于包括基因功能研究、蛋白质工程、重组抗体制备等生命科学的各个领域。稳转细胞株的构建通常是将外源基因克隆至含有某种筛选标记的载体上，将载体转染目的细胞并整合到染色体中，利用载体携带的筛选标记进行筛选，从而得到可稳定表达目的基因的细胞株。技术优势
实验流程
方案选择
| 整合效率 | 实验周期 | 优点 | 缺点 | |
| PiggyBac转座酶整合方案 | 高 | 短 | 操作方便，可制备较大片段的外源基因 | 不适用于转染效率低的细胞 |
| 慢病毒感染方案 | 高 | 较长 | 表达效率高，能感染大部分难转染细胞 | 需要包装慢病毒，不适用于大片段基因表达 |
服务标准
客户提供：1. 外源目的基因ID及模板；
2. 目的细胞（可选择由派致代购）；
3. 完全培养基1-2 L（派致提供DMEM及1640常规培养基）。
派致交付：按方指定案构建的细胞系及项目报告。
交付周期：8-25周，具体时间取决于方案选择、目的基因大小、细胞类型及生长情况。
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文献和实验1. 2 稳定转染细胞株的构建 原理： 稳定转染，就是转染的质粒DNA 整合到宿主细胞染色体上，使宿主细胞可 长期表达目的基因及蛋白。需要在瞬时转染基础上对靶细胞进行筛选或者应用高转染效率的病毒，根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物进行细胞传代，从而得到可稳定表达目的基因的细胞系。 应用： 观察目的基因及其表达蛋白在某种细胞中的功能（稳定，可长期进行研究） 一般流程：
问：目的蛋白7kd，筛了稳定株，可western检测不到，因为电泳时marker也跑得不好，因此不能确定是假阳性。载体上带了myc tag，不知做免疫荧光来检测是否可行？谢谢答：原理上可行。如果免疫荧光对你来说比wb更熟练的话，你可以选择用荧光来检测。反之，还是用wb检测，再把实验尽量做得好一些。用wb的话，可以用你target蛋白的特异性抗体，也可以用anti-myc的抗体，最好两者都做了，更能说明问题。不知道说的明白不？
之降解，是在 RNA 水平上的降低目的基因的表达。此时，基因敲除稳转株可以很大程度上规避这个问题。因为基因敲除稳转株是在基因组水平上通过基因序列的改变使其基因功能丧失，在敲除细胞中通常不会检测到靶蛋白的表达，而且敲除效果稳定，不能恢复，也就是永久性敲除了。但是基因敲除稳转株缺点是操作周期长，费用多，效率低。如何选择基因下调表达的方式，就要综合考虑了。那么同样是稳定株，单克隆？混合克隆？要怎么选？细胞：当需要去除细胞群体干扰因素的时候，推荐使用单克隆稳定细胞株，其基因组背景相对单一，对实验
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