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- 通过dCas9结合DNA甲基化转移酶介导特定位点的甲基化修饰
- 上海
- 2025年07月13日
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上海派致生物科技有限公司
- 服务名称：
DNA甲基化修饰细胞系定制
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基于CRISPR/Cas9技术的DNA甲基化修饰细胞系定制
技术简介
甲基化是表观修饰的重要部分，DNA甲基化可以引起DNA构象、稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变，从而影响基因表达。DNA链中含有很多CpG结构，双链DNA CpG中的胞嘧啶五位碳原子通常容易被甲基化，基因组中60~90%的CpG都被甲基化，未甲基化的CpG成簇出现在基因启动子核心序列或者转录起始位点。DNA甲基化转移酶可以催化CpG的甲基化反应。DNA甲基化转移酶有两种，Dnmt1是一种持续性甲基化转移酶，作用于只有一条链甲基化的DNA双链，使其完全甲基化，参与DNA复制过程中新合成链的甲基化修饰；Dnmt3a/Dnmt3b是一种从头甲基化转移酶，可以在CpG上产生新的甲基化修饰，首先半甲基化，继而全甲基化，该甲基化转移酶可能参与细胞生长分化的调控，在肿瘤基因甲基化中起到重要作用。
近年来CRISPR/Cas9技术得到快速发展，在基因切割活性失活的dCas9的5’端融合一个Dnmt3a，能够通过dCas9介导特定位点的甲基化修饰，调控相关基因的表达。
技术优势
1. 可实现特定DNA区域的甲基化修饰；2. 甲基化修饰效率可达80%以上；
3. 可实现高效的基因表达调控。
方案选择
| 修饰效率 | 实验周期 | 优点 | 缺点 | |
| PB转座酶整合方案 | 高 | 短 | 操作方便 | 不适用于转染效率低的细胞 |
| 慢病毒感染方案 | 高 | 较长 | 能感染大部分难转染细胞 | 需要包装慢病毒，周期较长 |
| 瞬时转染方案 | 低 | 较长 | 外源基因不整合 | 修饰效率相对较低 |
实验流程
载体信息
服务标准
客户提供：1. 目的修饰位点基因信息；
2. 目的细胞（可选择由派致代购）；
3. 完全培养基1-2 L（派致提供DMEM及1640常规培养基）。
派致交付：按指定方案构建的细胞系及项目报告。
交付周期：12-24周，具体时间取决于靶点复杂程度、细胞类型及生长情况。
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