CRISPR/Cas9基因敲除细胞系定制

基于CRISPR/Cas9技术基因敲除（knock-out）细胞系定制

技术简介

      根据目的基因序列设计合成sgRNA，将Cas9和sgRNA基因转染目的细胞，通过sgRNA引导Cas9核酸酶对目的基因位点进行切割，引起DNA双链断裂（Double-strand breaks, DSB），通过细胞自身的非同源末端修复（Non-homologous end joining, NHEJ）途径造成目的基因片段缺失或移码突变，进而实现目的基因敲除。

技术优势

1. 经多步优化的CRISPR/Cas9系统，适用于更广泛的哺乳动物细胞，提高了编辑率高，同时大大降低了脱靶效应。
2. 多种方案可供选择，满足不同研究需要。

实验流程

方案选择

方案	敲除效率	实验周期	优点
PiggyBac转座酶整合方案	高	短	操作方便
慢病毒感染方案	高	较长	能感染大部分难转染细胞
瞬时转染方案	低	较长	不整合外源基因到细胞基因组中
Base Editor方案	高	较长	不切割双链DNA，形成精确突变，产生提前终止密码子。

服务标准

客户提供：
1. 待敲除Gene ID；
2. 目的细胞（可选择由派致代购）；
3. 完全培养基1-2 L（派致提供DMEM及1640常规培养基）。
派致交付：按方指定案构建的细胞系及项目报告。
交付周期：12-30周，具体时间取决于方案选择、敲除靶点复杂程度、细胞类型及生长情况。