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- 基于CRISPR/Cas9技术的基因敲除细胞定制，提供单克隆细胞
- 上海
- 2025年07月16日
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上海派致生物科技有限公司
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基于CRISPR/Cas9技术基因敲除（knock-out）细胞系定制
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基于CRISPR/Cas9技术基因敲除（knock-out）细胞系定制
技术简介
根据目的基因序列设计合成sgRNA，将Cas9和sgRNA基因转染目的细胞，通过sgRNA引导Cas9核酸酶对目的基因位点进行切割，引起DNA双链断裂（Double-strand breaks, DSB），通过细胞自身的非同源末端修复（Non-homologous end joining, NHEJ）途径造成目的基因片段缺失或移码突变，进而实现目的基因敲除。
技术优势
1. 经多步优化的CRISPR/Cas9系统，适用于更广泛的哺乳动物细胞，提高了编辑率高，同时大大降低了脱靶效应。
2. 多种方案可供选择，满足不同研究需要。
实验流程
方案选择
| 方案 | 敲除效率 | 实验周期 | 优点 |
| PiggyBac转座酶整合方案 | 高 | 短 | 操作方便 |
| 慢病毒感染方案 | 高 | 较长 | 能感染大部分难转染细胞 |
| 瞬时转染方案 | 低 | 较长 | 不整合外源基因到细胞基因组中 |
| Base Editor方案 | 高 | 较长 | 不切割双链DNA，形成精确突变，产生提前终止密码子。 |
服务标准
客户提供：
1. 待敲除Gene ID；
2. 目的细胞（可选择由派致代购）；
3. 完全培养基1-2 L（派致提供DMEM及1640常规培养基）。
派致交付：按方指定案构建的细胞系及项目报告。
交付周期：12-30周，具体时间取决于方案选择、敲除靶点复杂程度、细胞类型及生长情况。
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文献和实验【原创】基因组编辑三大工具ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9筛选基因敲除细胞系阳性克隆Protocol
基因组编辑三大工具ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9 筛选基因敲除细胞系阳性克隆Protocol 上海南方模式生物研究中心 技术顾问 周效华 从2011年科学家实现TALEN技术，2013年科学家实现CRISPR/Cas9技术，这些技术的迅速成熟都给基础生物学研究、临床医学研究提供了更为方便和快捷的分子生物学工具。技术进步必将在未来给科学研究及基因治疗研究带来更为广泛的发力！这在2014年以来的频频出现的Cas9技术在各个领域的应用进展中可以清晰看到。欢迎感兴趣的朋友联系我交流
可以对所有细胞系和大多数常用实验动物的遗传物质进行改造。CRISPR 技术在人类遗传性疾病、病毒感染疾病和癌症的相关研究中具有广阔前景和巨大发展潜力。 操作流程： 1、靶位点确认及 sgRNA 设计 2、构建哺乳动物细胞 Cas9/sgRNA 载体 3、sgRNA 活性验证 4、细胞转染 5、筛选特定表型细胞 6、基因组 NGS 测序 7、建立稳定敲除的细胞株 研究思路： 1. 哺乳动物细胞基因敲除（knock-out）/敲入（knock-in） （1）sgRNA 设计 基因组定制化的 sgRNA 设计
近日，赛业生物科技（Cyagen Biosciences）宣布推出其全球专利技术TetraOneTM KO，一种不仅在速度上媲美TALEN、CRISPR/Cas9（把ES打靶基因敲除/敲入鼠的定制周期降低至6个月），而且避免了TALEN、CRISPR/Cas9脱靶效应困扰的革命性技术。TetraOneTM KO的出现，是ES打靶技术制备基因敲除鼠的一个重大突破。基因组编辑的技术进展传统ES打靶、TALEN和CRISPR/Cas9是基因组编辑的三大技术及主要工具。新一代核酸酶基因编辑技术
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