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实时荧光定量PCR技术是指在PCR反应体系中加入荧光染料或荧光集团,利用荧光信号来实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板浓度进行定量分析。
Ct值:给定的荧光检测阈值下,样本中目标基因DNA(即目标基因PCR模板量)产生可以检测到荧光信号的所需要的PCR循环数(即时间)。
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其特点有:
(1)用产生荧光信号的指示剂显示扩增产物的量,进行实时动态连续的荧光监测,避免终点定量的不准确性,并且消除了标本和产物的污染,且无复杂的产物后续处理过程。
(2)荧光信号通过荧光染料嵌入双链DNA,或荧光探针特异结合木得检测物等方法获得,大大提高了检测的灵敏度、特异性和精确性。Real-time O-PCR可以应用于mRNA表达的研究、DNA拷贝数的检测、单核苷酸多态性的测定、细胞因子的表达分析、肿瘤耐药基因表达的研究以及病毒感染的定量监测。
细胞样品注意事项:
- 考虑到运输问题,样品应为反转录好的cDNA,其次是新培养的活细胞,冻存细胞需复苏培养后方可送样,保证细胞的状态良好;每个样品至少需要106各细胞才能满足实验需要。
- 细胞样品长途运输,请直接使用TRNzol试剂洗脱、收集。
- 短途运输请将细胞置于新鲜培养液的培养瓶或培养板中,,保持25-37℃之间进行运输。
荧光定量PCR服务流程:
服务要求:
样品量:50-100mg动植物组织;105-107个培养细胞
样品和基因信息:提供明确样品名称,待测基因和内参基因索引号
引物信息:可自行设计,也可交由公司设计
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文献和实验Western Blot 实验 通过SDS-PAGE胶将不同的分子量的蛋白分离开,将目标蛋白转移到PVDF膜上,再利用抗原抗体的特异性结合,用特异性的一抗结合目标蛋白,用HRP标记的二抗结合一抗,再加以ECL发光液显色,检测目的蛋白在不同处理的样本中表达量的高低变化 服务优势及实验服务流程: 1、利用高性能试剂配合高通量全自动western blot机,提供超高灵敏性的western blot实验服务。超高灵敏度最低至15飞克抗原。 2、一抗的寄送需要泡沫盒加冰袋低温即送
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