real-time PCR(实时荧光定量PCR)

实时荧光定量PCR（real-time PCR）
Real-time qPCR就是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据。由于Real-time qPCR的众多优点，现在已经是生命科学领域的一项重要技术，并成为基因表达差异和文章发表不可或缺的部分。
普瑞华盛real-time qPCR技术服务，根据实验目的，设计实验方案（相对定量或绝对定量；SYBR Green I或Taqman探针方法），用完全按照符合国际标准（MIQE）的real-time qPCR试剂完成实验，提供符合文章发表的客观事实实验报告和原始数据。
操作流程：
1、客户提供样品及目的基因名称及登录号
2、我公司设计并合成引物及Taqman探针（探针法）
3、样品的RNA提取及逆转录
4、荧光定量PCR检测（3孔重复）
5、提供实验报告,包括实验流程，条件，使用仪器及试剂，标准曲线，扩增曲线，溶解曲线及原始Ct值
6、相对定量数据分析（ΔΔCt法）
服务要求：
细胞样品：新鲜或加Trizol后-80℃保存，数量大于5×106个；
组织样品：-80℃保存，干冰运输，数量大于50mg；
血液：-80℃保存，体积大于300μl；
纯化好的总RNA： OD260/OD280在1.9-2.1之间，完整性好；
总DNA（OD260/OD280在1.7-1.9之间，完整性好；
反转录好的cDNA：体积大于30μl（反转录的总RNA完整性好，纯度在1.9-2.1之间）；
提供待测基因序列或登录号。
实验报告部分组成：
原始数据
标准曲线
熔解曲线
扩增曲线