实时定量PCR/Co-IP/ChIP服务

实时定量PCR/Co-IP/ChIP服务

QPCR检测
逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极为微量RNA样品分析成为可能。该技术主要用于：分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。

操作步骤：
1、RNA提取并除去RNA中的基因组DNA污染
2、第一链cDNA的合成
3、用目的基因的上下游引物进行PCR反应
4、琼脂糖上进行凝胶电泳
5、成像分析软件Quantity One进行半定量
PCR条件的优化：
PCR条件的优化主要是①引物退火温度的调节，一般在引物设计软件推荐温度的上下2 ℃变化寻找最佳退火温度。②此外Mg2＋浓度的调节也非常重要，通常最佳浓度为2mM左右。③引物和模板的量等。
实验要求：
1、请您提供新鲜的且尽量多的材料，或直接提供纯化好的总RNA或DNA（大于5ug/样本）。如是如织：100－200mg
2、请通过EMAIL提供已知的全长基因序列。
3、请提供详细背景资料：DNA/RNA来源，丰度。
4、在实验前请您要确保目的基因可以表达，并确保您提供的实验信息的准确性。
服务承诺：
1.本公司会在最短的时间内快速将实验完成。
2.本公司保证检测结果准确、客观、可信。
3. 本公司保证不对外公开或不向第三方提供客户相关信息。
结果提供：
1、实验详细步骤，和相关数据。
2、完整的实验报告实验图片（含软件分析结果）


CO-IP检测
免疫共沉淀（Co-IP）主要原理是将纯化的抗体直接固定在琼脂糖基质上，从细胞裂解的液或其他复杂混合物中分离天然蛋白复合体。免疫共沉淀是研究蛋白：蛋白相互作用的一种常用方法，即利用抗体去免疫沉淀特定抗原（诱饵蛋白）并且共沉淀任何于该抗原相互作用的蛋白（目的蛋白）。
免疫共沉淀操作步骤
1、取 4℃保存的抗体固定柱，4℃ 1500 X g 离心 1min，弃滤液；
2、加入200μl IP裂解液洗涤离心柱，4℃ 1500 X g 离心 1min，弃滤液；
3、加入200μl预冷的 PBS洗涤离心柱，4℃ 1500 X g 离心 1min，弃滤液，于纸上吸干柱头液体，塞紧塞子；
4、加入（使用对照琼脂糖树脂预处理细胞裂解液：4）保存的滤液，拧紧盖子，4℃孵育3.5h；
5、安装收集管，取下并保留塞子，旋松盖子，4℃ 1500 X g 离心 1min，保留滤液；
6、加入200μl预冷的 PBS洗涤离心柱3次，4℃ 1500 X g 离心 1min，弃滤液；
7.安装收集管，向离心柱中树脂斜面加入10μl Elution Buffer，1500 X g 离心 1min，保存滤液；加入50μl Elution Buffer，室温放置5min，1500 Xg 离心 1min，保存滤液。


ChIP服务
染色质免疫共沉淀（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP）是基于体内分析发展起来的方法，也称结合位点分析法，在过去十年已经成为表观遗传信息研究的主要方法。这项技术帮助研究者判断在细胞核中基因组的某一特定位置会出现何种组蛋白修饰。ChIP不仅可以检测体内反式因子与DNA的动态作用，还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰与基因表达的关系。近年来，这种技术得到不断的发展和完善。采用结合微阵列技术在染色体基因表达调控区域检查染色体活性，是深入分析癌症、心血管疾病以及中央神经系统紊乱等疾病的主要通路的一种非常有效的工具。
操作流程：
1.甲醛处理细胞固定
2.收集细胞，超声破碎，凝胶电泳检测超声片段大小，估计样本DNA浓度。
3.加入目的蛋白的抗体，与靶蛋白-DNA复合物相互结合
4.加入ProteinA/proteinG琼脂珠或磁珠，结合抗体-靶蛋白-DNA复合物，IP反应
5.对沉淀下来的复合物进行清洗，除去非特异性结合
6.洗脱，得到富集的靶蛋白-DNA复合物
7.解交联，纯化富集的DNA-片断
8.对富集得到的DNA片段进行QPCR反应

实验服务流程

威斯腾生物服务项目

【本平台合作项目】
分子生物学、细胞生物学、基因敲出/入、模式动物、SPF动物保种、病理学检测、免疫学检测、影像学检测、原代培养、细胞药筛、CRISPR/Cas9基因编辑、基因芯片、高通量测序、蛋白组学、代谢组学、高通量高内涵筛选、药效学评价、药理毒理学实验、慢病毒包装与稳转株建立、SiRNA与纳米载药、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务！