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- Thermo scientific -fermentas
- ER1761
- 2025年09月27日
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大量
|
| Catalog# | Size, concentration | Supplied with: | Certificate of Analysis | MSDS |
| 10X Buffer Tango™ | ||||
| ER1761 | 500 u (10 u/µl) | 1.00 ml | ER1761 | |
| ER1762 | 2500 u (10 u/µl) | 1.00 ml | ER1762 |
Reaction conditions
| Recommended buffer for 100% activity | Optimal temperature | Enzyme activity in Fermentas buffers, % | Tango™ buffer for double digestion | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| B (blue) 1X |
G (green) 1X |
O (orange) 1X |
R (red) 1X |
Tango™ (yellow) 1X / 2X |
||||
| Tango™ | 37°C | 50-100 | 20-50 | 0-20 | 0-20 | 100 | 0-20 | 1X |
Lambda DNA
0.7%琼脂糖
13 切割位点
100%酶活性的反应条件
1X 缓冲液Tango™：
33 mM Tris-acetate (pH 7.9, 37°C), 10 mM Mg-acetate, 66 mM K-acetate, 0.1 mg/ml BSA。
37°C酶切。
33 mM Tris-acetate (pH 7.9, 37°C), 10 mM Mg-acetate, 66 mM K-acetate, 0.1 mg/ml BSA。
37°C酶切。
保存缓冲液
FspBI保存在：
10 mM Tris-HCl (pH 7.4, 25°C), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% �v/v)甘油。
10 mM Tris-HCl (pH 7.4, 25°C), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% �v/v)甘油。
连接和重新酶切
50倍FspBI过量酶切后，超过80%的酶切产物可以连接(连接体系：20-40 u T4 DNA连接酶/1 μg DNA，10% PEG)，超过95%的连接产物能重新酶切。
琼脂糖包埋DNA酶切
至少需要10 unit限制酶才能在16小时内完全切割1 µg琼脂糖包埋的λ DNA。
备注
重叠的Dam甲基化影响FspBI酶切。为了避免Dam甲基化的影响，样本DNA需要从dam-, dcm- 菌株中抽提，如GM2163 (#M0099)。
商业化同裂酶
采用REsearch™软件寻找同功酶。
双酶切
采用DoubleDigest™软件确定双酶切的最佳条件。
兼容性末端
Csp6I, NdeI, Tru1I, VspI。
甲基化影响
Dam: 可能重叠 – 不影响。
Dcm: 无重叠 – 不影响。
CpG: 无重叠 – 不影响。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 无重叠 – 不影响。
Dcm: 无重叠 – 不影响。
CpG: 无重叠 – 不影响。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 无重叠 – 不影响。
| Methylation type | Sequence | Cleavage effect |
|---|---|---|
| Dam (GATC) | 5'...CTAGm6A TC ...3' |
不阻止酶切 |
| bp from the recognition site to fragment end | ||||
|---|---|---|---|---|
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 20-50 | 50-100 | |||
| Lambda | ΦX174 | M13mp18/19 | pBR322 | puc18/19 | pUC57 |
|---|---|---|---|---|---|
| 13 | 3 | 5 | 5 | 4 | 4 |
| pTZ19R/U | pTZ57R | pBluescriptIIKS(-/+) | pBluescriptIISK(-/+) | pACYC177 | pACYC184 |
| 5 | 5 | 6 | 6 | 4 | 4 |
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