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- Thermo scientific -fermentas
- ER1591
- 2025年11月06日
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- 详细信息
- 技术资料
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大量
|
| Catalog# | Size, concentration | Supplied with: | Certificate of Analysis | MSDS | |
| 10X Buffer Tango™ | 3X BfiI Stop Solution | ||||
| ER1591 | 50 u (1-3 u/µl) | 1.00 ml | 0.50 ml | ER1591 | |
Reaction conditions
| Recommended buffer for 100% activity | Optimal temperature | Enzyme activity in Fermentas buffers, % | Tango™ buffer for double digestion | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| B (blue) 1X |
G (green) 1X |
O (orange) 1X |
R (red) 1X |
Tango™ (yellow) 1X / 2X |
||||
| Tango™ | 37°C | 20-50 | 20-50 | 0-20 | 0-20 | 100 | 0-20 | 1X |
Lambda DNA
0.7%琼脂糖
4 切割位点
100%酶活性的反应条件
1X 缓冲液Tango™：
33 mM Tris-acetate (pH 7.9, 37°C), 10 mM Mg-acetate, 66 mM K-acetate, 0.1 mg/ml BSA。
37°C酶切。
33 mM Tris-acetate (pH 7.9, 37°C), 10 mM Mg-acetate, 66 mM K-acetate, 0.1 mg/ml BSA。
37°C酶切。
保存缓冲液
BfiI保存在：
10 mM Tris-HCl (pH 7.4, 25°C), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。
10 mM Tris-HCl (pH 7.4, 25°C), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。
连接和重新酶切
10倍BfiI过量酶切后，超过40%的pBR322 DNA酶切产物可以连接，超过90%的连接产物能重新酶切。
酶切反应终止
不要试图通过加入EDTA终止酶切反应(见备注)。如果酶切DNA产物无需后续酶处理，可用含有SDS的反应终止液或BfiI反应终止液来终结反应过程(加入终止液后还需65°C加热10分钟处理方能凑效)。如果切割的DNA还有后续酶操作过程，选择65°C加热20分钟使酶失活。
3X BfiI反应终止液（组分）
(使用前预热，确保溶液为均匀液相)
0.6% SDS、0.05%溴酚蓝和50%甘油。
0.6% SDS、0.05%溴酚蓝和50%甘油。
备注
- BfiI是目前唯一的非Mg2+ 离子依赖性的可特异性切割DNA分子的限制酶(Sapranauskas, R., et al., J.Biol.Chem., 275, 30878-30885, 2000)。
- EDTA螯合Mg2+ 离子不会抑制BfiI活性，反而产生非特异性产物。当酶切温度超过37°C时，非特异性切割增加。
- 超过40倍过量酶切会导致星活性。
商业化同裂酶
采用REsearch™软件寻找同功酶。
双酶切
采用DoubleDigest™软件确定双酶切的最佳条件。
甲基化影响
Dam: 无重叠 – 不影响。
Dcm: 无重叠 – 不影响。
CpG: 无重叠 – 不影响。
EcoKI: 可能重叠 – 影响不确定。
EcoBI: 可能重叠 – 影响不确定。
Dcm: 无重叠 – 不影响。
CpG: 无重叠 – 不影响。
EcoKI: 可能重叠 – 影响不确定。
EcoBI: 可能重叠 – 影响不确定。
| bp from the recognition site to fragment end | ||||
|---|---|---|---|---|
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 50-100 | ||||
| Lambda | ΦX174 | M13mp18/19 | pBR322 | puc18/19 | pUC57 |
|---|---|---|---|---|---|
| 4 | 0 | 1 | 5 | 2 | 2 |
| pTZ19R/U | pTZ57R | pBluescriptIIKS(-/+) | pBluescriptIISK(-/+) | pACYC177 | pACYC184 |
| 2 | 2 | 2 | 2 | 1 | 3 |
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