BbsI

CRISPR/Cas9 基因敲除实验-- sgRNA 及引物设计

来看一下。提交订单，等待引物到达：华大基因的速度非常快，大约在 2 - 3 个工作日即可拿到，在等待期间需要准备好：LB + 抗生素抗性平板；感受态细胞及相应培养基；无内毒素的 Cas9 载体质粒；BbsI 限制性内切酶；质粒小提试剂盒；常规限制性内切酶。

手把手教你利用 CRISPR-Cas9 系统精准敲除靶标基因

puromycin 抗性筛选标记。图 3 PX458M 图谱图 4 PX459M 图谱图 5 EZ-GuideXH 图谱PX458M 和 PX459M 载体是从张峰实验室 PX458 and PX459 载体改造过来的。主要是引入了第二个向导性 RNA 插入的多克隆位点。EZ-GuideXH 来源于 EZ-T 克隆载体。四、Guide RNA 的插入根据张峰实验的实验操作方法， guide RNA 插入方法很简单。如图 6 所示，可以用 BbsI 消化 PX458 载体, Guide RNA 是通过引物退火方法

搞定 CRISPR/Cas9 系统操作

CRISPR/Cas9 是一种强大的基因组编辑工具，今天我们介绍 CRISPR/Cas9 系统操作。以下操作说明是基于作者冰糖个人实验室操作，仅供参考。 质粒介绍我们使用的是 Feng Zhang 实验室的系统的 pX330 质粒，如下图所示： 酶切系统 37 ℃, 3 hr；Run 1% gel，回收。Elute 到 50 mL H2O。我们利用 BbsI 消化载体形成粘末端，以利于下游 oligo 退火产物的连接；酶切时请充分，且绝对不能加 CIP 处理