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- Thermo scientific -fermentas
- ER1132
- 2025年10月05日
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|
| Catalog# | Size, concentration | Supplied with: | Certificate of Analysis | MSDS | |
| 10X Buffer SacI | 10X Buffer Tango™ | ||||
| ER1132 | 5 x 1200 u (10 u/µl) | 2 x 1.00 ml | 1.00 ml | ER1132 | |
| ER1135 | 2000 u (10 u/µl) | 1.00 ml | 1.00 ml | ER1135 | |
| ER1137 | 500 u (10 u/µl) | 1.00 ml | 1.00 ml | ER1137 | |
Reaction conditions
| Recommended buffer for 100% activity | Optimal temperature | Enzyme activity in Fermentas buffers, % | Tango™ buffer for double digestion | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| B (blue) 1X |
G (green) 1X |
O (orange) 1X |
R (red) 1X |
Tango™ (yellow) 1X / 2X |
||||
| SacI | 37°C | 50-100 | 20-50 | 0-20 | 0-20 | 50-100 | 20-50 | 1X or 2X |
Lambda DNA
0.7%琼脂糖
2 切割位点
100%酶活性的反应条件
1X 缓冲液SacI：
10 mM Bis-Tris Propane-HCl (pH 6.5, 37°C), 10 mM MgCl2 , 0.1 mg/ml BSA。
37°C酶切。
10 mM Bis-Tris Propane-HCl (pH 6.5, 37°C), 10 mM MgCl2 , 0.1 mg/ml BSA。
37°C酶切。
保存缓冲液
SacI保存在：
10 mM Tris-HCl (pH 7.4, 25°C), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。
10 mM Tris-HCl (pH 7.4, 25°C), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。
连接和重新酶切
50倍SacI过量酶切后，超过95%的酶切产物可以连接和重新酶切。
琼脂糖包埋DNA酶切
至少需要5 unit限制酶才能在16小时内完全切割1 µg琼脂糖包埋的λ DNA。
备注
- SacI对GAGmCTC识别序列中的C碱基甲基化敏感(而不是GAGCTmC序列)。SacI对GmAGCTC识别序列中的A碱基甲基化不敏感。AluI甲基化酶(AGmCT)可用于阻止SacI酶切。
- 超螺旋质粒DNA切割所需的SacI酶量是线性质粒DNA的5倍。
- 抗凝剂处理的外周血和骨髓样本纯化时，样本DNA中残留的临床抗凝剂会抑制SacI酶活性。常规样本纯化时添加的EDTA和ACD(citricacid-sodiumcitrate- dextrose)浓度会抑制SacI酶切；而hearin(肝素)需要相当于三倍常规浓度时才能抑制SacI酶切(Coad,J.e., et al., Inhibition of restriction endonucleases by common clinical anticoagulants, Anal. Biochem., 205, 368-369,1992)。
商业化同裂酶
采用REsearch™软件寻找同功酶。
双酶切
采用DoubleDigest™软件确定双酶切的最佳条件。
兼容性末端
Alw21I, Eco24I, SduI。
甲基化影响
Dam: 无重叠 – 不影响。
Dcm: 无重叠 – 不影响。
CpG: 可能重叠 – 不影响。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 可能重叠 – 不影响。
Dcm: 无重叠 – 不影响。
CpG: 可能重叠 – 不影响。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 可能重叠 – 不影响。
| Methylation type | Sequence | Cleavage effect |
|---|---|---|
| CpG | 5'...m5C G AGCTm5C G ...3' |
不阻止酶切 |
| EcoBI (TGA(N)8 TGCT) | 5'...TGm6AGCTC(N)4 TGCT...3' |
不阻止酶切 |
| bp from the recognition site to fragment end | ||||
|---|---|---|---|---|
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 50-100 | ||||
| Lambda | ΦX174 | M13mp18/19 | pBR322 | puc18/19 | pUC57 |
|---|---|---|---|---|---|
| 2 | 0 | 1 | 0 | 1 | 1 |
| pTZ19R/U | pTZ57R | pBluescriptIIKS(-/+) | pBluescriptIISK(-/+) | pACYC177 | pACYC184 |
| 1 | 1 | 1 | 1 | 0 | 0 |
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