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- Thermo scientific -fermentas
- ER1911
- 2025年10月08日
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大量
|
| Catalog# | Size, concentration | Supplied with: | Certificate of Analysis | MSDS | |
| 10X Buffer R | 10X Buffer Tango™ | ||||
| ER1911 | 100 u (5 u/µl) | 1.00 ml | 1.00 ml | ER1911 | |
Reaction conditions
| Recommended buffer for 100% activity | Optimal temperature | Enzyme activity in Fermentas buffers, % | Tango™ buffer for double digestion | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| B (blue) 1X |
G (green) 1X |
O (orange) 1X |
R (red) 1X |
Tango™ (yellow) 1X / 2X |
||||
| R | 37°C | 0-20 | 0-20 | 0-20 | 100 | 0-20 | 100 | 2X |
Lambda DNA (dam- )
0.8%琼脂糖
24 切割位点
100%酶活性的反应条件
1X 缓冲液R：
10 mM Tris-HCl (pH 8.5, 37°C), 10 mM MgCl2 , 100 mM KCl, 0.1 mg/ml BSA。
37°C酶切。
10 mM Tris-HCl (pH 8.5, 37°C), 10 mM MgCl2 , 100 mM KCl, 0.1 mg/ml BSA。
37°C酶切。
保存缓冲液
TstI保存在：
10 mM Tris-HCl (pH 7.5, 25°C), 50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。
10 mM Tris-HCl (pH 7.5, 25°C), 50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。
连接和重新酶切
10倍TstI过量酶切后，超过80%的酶切产物可以连接和重新酶切。
琼脂糖包埋DNA酶切
至少需要5 unit限制酶才能在16小时内完全切割1 µg琼脂糖包埋的λ DNA。
备注
- 底物为λ DNA (dam- ) (#SD0021)。
- 重叠的Dam甲基化抑制TstI酶切。为了避免Dam甲基化的影响，样本DNA需要从dam-, dcm- 菌株中抽提，如GM2163 (#M0099)。
- 反应体系中的SAM会导致TstI的不完全酶切。
- 超过10倍过量酶切会导致星活性。 li>TstI可能会吸附在切割的DNA分子上，从而改变DNA条带的电泳纯移率。为了避免出现非正常条带，上样电泳前，建议采用6X Loading Dye & SDS溶液(#R1151)处理样本，或者在 DNA酶切产物中加入SDS并加热处理。
商业化同裂酶
采用REsearch™软件寻找同功酶。
双酶切
采用DoubleDigest™软件确定双酶切的最佳条件。
甲基化影响
Dam: 可能重叠 – 阻止酶切。
Dcm: 可能重叠 – 不影响。
CpG: 可能重叠 – 不影响。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 可能重叠 – 影响不确定。
Dcm: 可能重叠 – 不影响。
CpG: 可能重叠 – 不影响。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 可能重叠 – 影响不确定。
| Methylation type | Sequence | Cleavage effect |
|---|---|---|
| Dcm (CCWGG) | 5'...CAC(N)6 TCm5CW GG ...3' |
不阻止酶切 |
| CpG | 5'...CAm5C G (N)5 TCC...3' |
不阻止酶切 |
| CpG | 5'...CAC(N)5 TCm5C G ...3' |
不阻止酶切 |
| Dam (GATC) | 5'...CAC(N)4Gm6A TC C...3' |
阻止酶切 |
| bp from the recognition site to fragment end | ||||
|---|---|---|---|---|
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| Lambda | ΦX174 | M13mp18/19 | pBR322 | puc18/19 | pUC57 |
|---|---|---|---|---|---|
| 24 | 0 | 1 | 1 | 0 | 0 |
| pTZ19R/U | pTZ57R | pBluescriptIIKS(-/+) | pBluescriptIISK(-/+) | pACYC177 | pACYC184 |
| 0 | 0 | 0 | 0 | 2 | 2 |
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