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- ER1421
- 2025年11月06日
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|
| Catalog# | Size, concentration | Supplied with: | Certificate of Analysis | MSDS | |
| 10X Buffer O | 10X Buffer Tango™ | ||||
| ER1421 | 500 u (10 u/µl) | 1.00 ml | 1.00 ml | ER1421 | |
| ER1422 | 2500 u (10 u/µl) | 1.00 ml | 1.00 ml | ER1422 | |
Reaction conditions
| Recommended buffer for 100% activity | Optimal temperature | Enzyme activity in Fermentas buffers, % | Tango™ buffer for double digestion | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| B (blue) 1X |
G (green) 1X |
O (orange) 1X |
R (red) 1X |
Tango™ (yellow) 1X / 2X |
||||
| O | 37°C | 20-50 | 50-100 | 100 | 50-100 | 50-100 | 50-100 | 1X or 2X |
Lambda DNA (dcm- )
1.4%琼脂糖
185 切割位点
100%酶活性的反应条件
1X 缓冲液O：
50 mM Tris-HCl (pH 7.5, 37°C), 10 mM MgCl2 , 100 mM NaCl, 0.1 mg/ml BSA。
37°C酶切。
50 mM Tris-HCl (pH 7.5, 37°C), 10 mM MgCl2 , 100 mM NaCl, 0.1 mg/ml BSA。
37°C酶切。
保存缓冲液
Bme1390I保存在：
10 mM Tris-HCl (pH 7.5, 25°C), 200 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。
10 mM Tris-HCl (pH 7.5, 25°C), 200 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。
连接和重新酶切
50倍Bme1390I过量酶切后，超过80%的酶切产物可以连接(连接体系：20-40 u T4 DNA连接酶/1 μg酶切产物，10% PEG)，超过90%连接产物能重新酶切。
备注
- 底物为λ DNA (dcm- ) (#SD0021)。
- 重叠的Dcm甲基化抑制Bme1390I酶切。为了避免Dcm甲基化的影响，样本DNA需要从dam-, dcm- 菌株中抽提，如GM2163 (#M0099)。
商业化同裂酶
采用REsearch™软件寻找同功酶。
双酶切
采用DoubleDigest™软件确定双酶切的最佳条件。
兼容性末端
CC^SGG – BcnI, SatI;
CC^WGG – MvaI, SatI。
CC^WGG – MvaI, SatI。
甲基化影响
Dam: 无重叠 – 不影响。
Dcm: 可能重叠 – 阻止酶切。
CpG: 可能重叠 – 阻止酶切。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 无重叠 – 不影响。
Dcm: 可能重叠 – 阻止酶切。
CpG: 可能重叠 – 阻止酶切。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 无重叠 – 不影响。
| Methylation type | Sequence | Cleavage effect |
|---|---|---|
| Dcm (CCWGG) | 5'...Cm5CW GG ...3' |
阻止酶切 |
| CpG | 5'...Cm5C G GG...3' |
阻止酶切 |
| bp from the recognition site to fragment end | ||||
|---|---|---|---|---|
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 20-50 | 50-100 | |||
| Lambda | ΦX174 | M13mp18/19 | pBR322 | puc18/19 | pUC57 |
|---|---|---|---|---|---|
| 185 | 3 | 11 | 16 | 12 | 12 |
| pTZ19R/U | pTZ57R | pBluescriptIIKS(-/+) | pBluescriptIISK(-/+) | pACYC177 | pACYC184 |
| 10 | 10 | 11 | 11 | 14 | 22 |
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