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- Thermo scientific -fermentas
- ER1601
- 2025年09月28日
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| Catalog# | Size, concentration | Supplied with: | Certificate of Analysis | MSDS | |
| 10X Buffer Tango™ | 50X SAM | ||||
| ER1601 | 50 u (1-3 u/µl) | 1.00 ml | 0.10 ml | ER1601 | |
| Recommended buffer for 100% activity | Optimal temperature | Enzyme activity in Fermentas buffers, % | Tango™ buffer for double digestion | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| B (blue) 1X |
G (green) 1X |
O (orange) 1X |
R (red) 1X |
Tango™ (yellow) 1X / 2X |
||||
| Tango™ | 37°C | 20-50 (+SAM) | 20-50 (+SAM) | 0-20 (+SAM) | 0-20 (+SAM) | 100 (+SAM) | 0-20 (+SAM) | 1X (+SAM) |
Lambda DNA (dam- )
1.0%琼脂糖
58 切割位点
[33 mM Tris-acetate (pH 7.9, 37°C), 10 mM Mg-acetate, 66 mM K-acetate, 0.1 mg/ml BSA] + 0.05 mM S-腺苷甲硫氨酸。
37°C酶切。
10 mM磷酸钾 (pH 7.4, 25°C), 100 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。
备注
- Hin4I酶切活性需要Mg2+ 离子，S-腺苷甲硫氨酸可刺激Hin4I活性。0.05 mM S-腺苷甲硫氨酸将GsuI活性提升10倍。但是Hin4I仍然很难完全切割某些底物DNA分子。
- Hin4I浓度是底物DNA分子获得最大切割水平时对应的浓度，并且要保证此浓度不会改变酶切的带型。
- Hin4I在识别序列两端酶切。该酶的独特之处是其在识别序列3’端存在一个简并切割位点(13或14碱基)。
- 底物为λ DNA (dam- ) (#SD0021)。
- 重叠的Dam甲基化抑制Hin4I酶切。为了避免Dam甲基化的影响，样本DNA需要从dam-, dcm- 菌株中抽提，如GM2163 (#M0099)。
Dcm: 无重叠 – 不影响。
CpG: 可能重叠 – 部分影响。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 可能重叠 – 影响不确定。
| Methylation type | Sequence | Cleavage effect |
|---|---|---|
| Dam (GATC) | 5'...Gm6A TC (N)4 VTC...3' |
阻止酶切 |
| Dam (GATC) | 5'...GAY(N)4Gm6A TC ...3' |
阻止酶切 |
| CpG | 5'...m5C G AY(N)5 VTC...3' |
部分影响 |
| CpG | 5'...GAY(N)5 VTm5C G ...3' |
部分影响 |
| CpG | 5'...m5C G AY(N)5 VTm5C G ...3' |
影响不确定 |
| Lambda | ΦX174 | M13mp18/19 | pBR322 | puc18/19 | pUC57 |
|---|---|---|---|---|---|
| 58 | 9 | 5 | 5 | 2 | 3 |
| pTZ19R/U | pTZ57R | pBluescriptIIKS(-/+) | pBluescriptIISK(-/+) | pACYC177 | pACYC184 |
| 2 | 3 | 2 | 2 | 8 | 6 |
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文献和实验内切酶列表：Enzymes Cleaving DNA on Both Sides of Their Recognition Sequence
^(8/13)GAG(N)5 GTTC(12/7)^ PpiI ^(8/13-14)GAY(N)5 VTC(13-14/8)^ Hin4I ^(10/12)GCA(N)6 TCG(12/10)^ BcgI ^(7/12-13)GGA(N)6 GTTC(12-13/7)^
酸碱滴定法所用的指示剂为酸碱指示剂。指示剂作用原理简述如下： 酸碱指示剂一般是弱的有机酸或有机碱。在溶液中存在解离平衡；若 HIn 和 In ˉ分别表示指示剂的酸式和碱式，在溶液中达到平衡： c φ =1mol · L -1 ，称为标准浓度。 比值 c （ In ˉ） /c （ HIn ）与 c （ H ）有关。一般 c （ In ˉ） /c （ HIn ）≥ 10 ，则看到
Plasmid Vectors for the Analysis of Protein-Induced DNA Bending
between the EcoRI and Hin dIII sites. pBend3 was constructed by cloning of the 236-base-pair Eco RI-Hin dIII fragment of pBend2 (4 ) into pBluescript SK (Stratagene). pBluescript is a high-copy-number plasmid and generates a large amount of DNA upon plasmid
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