AMV Reverse Transcriptase

说明

AMV Reverse Transcriptase (RT) 是由大肠杆菌表达的重组禽类成髓细胞瘤逆转录酶。AMV RT是一个异源二聚体，由两个不同的亚基组成(alpha和beta 亚基)。AMV RT具有多种活性，包括RNA和DNA依赖的DNA polymerase活性、DNA-RNA解旋活性、序列特异的Mn²⁺ -依赖性内切 核酸酶活性和RNase H活性。AMV RT在很宽的温度范围( 45-60°C) 内保持活性，因此可逆转录含有大量二级结构的RNA。

来源

大肠杆菌，含有编码AMV的基因pol 。

活性单位定义

1 个活性单位是指在37°C、10分钟内将1 nmol dTMP合成掺入多聚的核苷酸片段(吸附在DE-81上)所需的酶量。

酶活性分析混合物：50 mM Tris-HCl (pH 8.3), 8 mM MgCl₂ , 30 mM KCl, 1 mM DTT, 0.5 mM dTTP, 0.4 MBq/ml [³ H]-dTTP, 0.4 mM polyA・oligo(dT)_12-18 。

保存缓冲液

保存缓冲液组分：
200 mM磷酸钾, 2 mM DTT, 0.2% (v/v) Triton X-100和50% (v/v) 甘油(pH 7.2)。

5X AMV RT缓冲液

250 mM Tris-HCl (pH 8.5, 25°C), 40 mM MgCl₂ , 150 mM KCl, 5 mM DTT。

质量控制

相关测试表明无内切或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染。功能测试：第一链cDNA合成和RT-PCR。

抑制与失活

• 抑制剂：金属螯合剂和无机磷酸盐。焦磷酸钠可降低AMV RT活性，但是当其浓度<4 mM时可，增加全长cDNA的产量(2)。
• 失活：85°C加热5分钟。