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RNase T1

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  • 2025年11月06日
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    • - 80°C加热20分钟不会使酶失活
    • - 重组酶
    • - LO合格
    Catalog# Size, concentration Certificate of Analysis MSDS
    EN0541 100,000 u (1000 u/µl) EN0541
    EN0542 500,000 u (1000 u/µl) EN0542
    Applications

    • 除去DNA抽提物中的RNA。
    • RNA测序(1)。
    • 核糖核酸酶保护分析,与RNase A协 同作用(2),操作方法如下所述。
    • 除去重组蛋白抽提物中的RNA。
    • 检测"G-less cassette"DNA模板体外转录合成的RNA转录子水平(3)。
    说明
    RNase T1是一种内切核糖核酸酶,在G残基位点特异性降解单链RNA,见图1。

    该酶通过形成核苷2’, 3’-环磷酸中间体来切割3’-鸟苷残基与邻近核苷酸5’-OH 基团之间的磷酸二酯键(1)。反应产物是3’-GMP和含有3’-GMP末端寡核苷酸。 RNase T1发挥活性无需金属离子参与。


    来源
    大肠杆菌细胞,含有米曲霉(Aspergillus oryzae )来源的克隆基因rntA

    分子量
    11.2 kDa,单体。

    活性单位定义
    1个活性单位是指37°C (pH 7.5)条件下,酵母RNA溶液水解15分钟使其260 nm波长吸光值增加1.0所需的酶量。

    酶活性分析混合物:50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 2 mM EDTA, 3 mg/mll酵母RNA。


    保存缓冲液
    保存缓冲液组分:
    50 mM Tris-HCl (pH 7.4) 和50% (v/v)甘油。

    质量控制
    相关测试表明无内切或外切脱氧核糖核酸酶、蛋白酶污染。功能测试方法为质粒DNA纯化过程中的RNA降解(与RNase A协同作用)。

    抑制与失活
    • 抑制剂:金属离子Mg2+ , Ca2+ , Zn2+ , Fe2+ , Cu2+ (MgCl2 ,100�mM浓度时抑制效率约为40%;CaCl2 ,10�mM浓度时抑制效率约为30%;Zn2+ , Fe2+ , Cu2+ 在 1 mM时抑制效果很强)、单核苷酸 (2’-GMP,3’-GMP等)、guanilyl-2’,5’-尿苷(4)。
    • 失活:热失活是可逆的,建议采用过 柱纯化或苯酚/氯仿抽提除去该酶。


    图1。RNase T1 活性。

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