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- Thermo scientific -fermentas
- EP0081
- 2025年11月03日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
大量
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| Catalog# | Size, concentration | Supplied with: | Certificate of Analysis | MSDS |
| 10X Reaction Buffer | ||||
| EP0081 | 300 u (10 u/µl) | 0.40 ml | EP0081 |
- Features
-
- 很强的3’=>5’ 外切核酸酶活性，大约是Klenow Fragment的1000倍(1)。
- 在Fermentas公司所有限制酶缓冲液中都有活性。
- Applications
-
- 除去残留的基因组DNA，纯化共价闭环的DNA分子。
- 长片段引物延伸反应 (1)。
- DNA 3’-末端标记 (1)。
- 定点突变位点的链延伸反应 (2)。
- DNA 5’-突出位点补平。
- 第二链cDNA合成 (3)。
- 原位检测凋亡相关DNA片段 (4)。
说明
T7 DNA Polymerase是一种模板依赖型DNA聚合酶，催化5’=>3’方向的DNA合成。该DNA聚合酶具有高持续合成能力，可持续合成长片段DNA。该酶对单链和双链DNA有3’=>5’ 外切核酸酶活性。
来源
两个大肠杆菌菌株，一个菌株含有T7噬菌体克隆基因5，另外一个菌株含有大肠杆菌克隆基因trxA 。
分子量
T7 DNA Polymerase由两个亚基组成：80 �kDa多肽(T7噬菌体基因5表达产物)和12 �kDa硫氧还蛋白(大肠杆菌trxA基因表达产物)。
活性单位定义
1个活性单位是指在37°C，30分钟内将10 nmol脱氧核糖核苷酸掺入多聚核苷酸片段(吸附在DE-81上)所需的酶量。
酶活性分析混合物：40 mM Tris-HCl (pH 7.5), 10 mM MgCl2 , 1 mM DTT, 0.1 mg/ml BSA, 0.33 mM各种dNTP, 0.4 MBq/ml [3 H]-dTTP, 0.5 mM碱性变性的牛胸腺DNA。
保存缓冲液
保存缓冲液组分：
20 mM磷酸钾 (pH 7.4), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA和50% (v/v)甘油。
20 mM磷酸钾 (pH 7.4), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA和50% (v/v)甘油。
10X 反应缓冲液
400 mM Tris-HCl (pH 7.5, 25°C), 100 mM �gCl2 , 10 mM DTT。
质量控制
测试表明无内切脱氧核糖核酸酶污染。
抑制与失活
- 抑制剂：金属螯合剂、修饰试剂(无水醋酸和N-乙基顺丁烯二酰亚胺可使3’→5’ 外切核酸酶失活，但是不影响聚合酶活性)(5)。
- 失活：75°C加热10分钟。
备注
37°C分析时需要短时间孵育 (6)。
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