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T7 DNA Polymerase

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  • Thermo scientific -fermentas
  • EP0081
  • 2025年11月03日
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    • - 推荐的缓冲液 : FastDigest®缓冲液
    • - 推荐的缓冲液 : Tango™
    • - 推荐的缓冲液 : B
    • - 推荐的缓冲液 : G
    • - 推荐的缓冲液 : O
    • - 推荐的缓冲液 : R
    • - 热失活75°C, 10 min
    • - 重组酶
    Catalog# Size, concentration Supplied with: Certificate of Analysis MSDS
    10X Reaction Buffer
    EP0081 300 u (10 u/µl) 0.40 ml EP0081
    Features

    • 很强的3’=>5’ 外切核酸酶活性,大约是Klenow Fragment的1000倍(1)。
    • 在Fermentas公司所有限制酶缓冲液中都有活性。
    Applications

    • 除去残留的基因组DNA,纯化共价闭环的DNA分子。
    • 长片段引物延伸反应 (1)。
    • DNA 3’-末端标记 (1)。
    • 定点突变位点的链延伸反应 (2)。
    • DNA 5’-突出位点补平。
    • 第二链cDNA合成 (3)。
    • 原位检测凋亡相关DNA片段 (4)。
    说明
    T7 DNA Polymerase是一种模板依赖型DNA聚合酶,催化5’=>3’方向的DNA合成。该DNA聚合酶具有高持续合成能力,可持续合成长片段DNA。该酶对单链和双链DNA有3’=>5’ 外切核酸酶活性。

    来源
    两个大肠杆菌菌株,一个菌株含有T7噬菌体克隆基因5,另外一个菌株含有大肠杆菌克隆基因trxA

    分子量
    T7 DNA Polymerase由两个亚基组成:80�kDa多肽(T7噬菌体基因5表达产物)和12�kDa硫氧还蛋白(大肠杆菌trxA基因表达产物)。

    活性单位定义
    1个活性单位是指在37°C,30分钟内将10 nmol脱氧核糖核苷酸掺入多聚核苷酸片段(吸附在DE-81上)所需的酶量。

    酶活性分析混合物:40 mM Tris-HCl (pH 7.5), 10 mM MgCl2 , 1 mM DTT, 0.1 mg/ml BSA, 0.33 mM各种dNTP, 0.4 MBq/ml [3 H]-dTTP, 0.5 mM碱性变性的牛胸腺DNA。


    保存缓冲液
    保存缓冲液组分:
    20 mM磷酸钾 (pH 7.4), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA和50% (v/v)甘油。

    10X 反应缓冲液
    400 mM Tris-HCl (pH 7.5, 25°C), 100 mM�gCl2 , 10 mM DTT。

    质量控制
    测试表明无内切脱氧核糖核酸酶污染。

    抑制与失活
    • 抑制剂:金属螯合剂、修饰试剂(无水醋酸和N-乙基顺丁烯二酰亚胺可使3’→5’ 外切核酸酶失活,但是不影响聚合酶活性)(5)。
    • 失活:75°C加热10分钟。

    备注
    37°C分析时需要短时间孵育 (6)。


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