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- Thermo scientific -fermentas
- EN0531
- 2025年11月04日
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- 详细信息
- 技术资料
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大量
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| Catalog# | Size, concentration | Certificate of Analysis | MSDS |
| EN0531 | 10 mg (10 mg/ml) | EN0531 |
- Features
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- 无DNase活性，使用前无需加热。
- Applications
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- 质粒和基因组DNA制备(3, 4)。
- 除去重组蛋白抽提物中的RNA。
- 核糖核酸酶保护分析，与RNase T1协同作用(1)。
- DNA或RNA单碱基突变图谱绘制(5, 6)。
说明
RNase A, DNase and protease-free是一种内切核糖核酸酶，在C和U残基位置特异性降解单链RNA，见图1。该酶可以切割核苷酸5’-核糖与邻近嘧啶核苷3’-核糖上磷酸基团之间的磷酸二酯键。产生的2’, 3’-环磷酸可以水解为相应的3’-核苷磷酸盐(1, 2)。
浓度
10 �mg/ml。蛋白浓度通过其在278 nm(摩尔吸光系数=9800 M-1 cm-1 )的吸光值来测定(7)。
来源
牛胰腺。
分子量
13.7 kDa，单体。
活性单位定义
1个活性单位是指37°C (pH 5.0)条件下，酵母RNA溶液水解导致其260 nm波长吸光值增加1.0所需要的酶量。
50 units大致相当于1 �Kunitz unit (8)。
特异性活性
100 Kunitz units/mg蛋白)。
保存缓冲液
保存缓冲液组分：
50 mM Tris-HCl (pH 7.4)和50% (v/v)甘油。
50 mM Tris-HCl (pH 7.4)和50% (v/v)甘油。
质量控制
相关测试表明无内切或外切脱氧核糖核酸酶、蛋白酶污染。功能检测方法为质粒DNA纯化过程中的RNA降解。
抑制与失活
- 抑制剂：目前最有效的抑制剂是哺乳动物核糖核酸酶抑制剂，如Ribolock™ RNase Inhibitor (#EO0381)。其它抑制剂：尿苷2’,3’-环钒酸盐、5’-双磷酸腺苷3’-磷酸盐和5’-双磷酸腺苷2’-磷酸盐(2)、SDS、焦碳酸二乙酯（DEPC）、4 M异硫氰酸胍加上0.1M 2 -巯基乙醇、重金属离子等。
- 失活：加热不能使之失活，建议采用过柱法或苯酚/氯仿抽提除去该酶。
备注
- RNase A的推荐浓度(1-100 �μg/ml)因应 用类型不同而异。
- 该酶在多种反应条件下均有活性。低盐离子浓度时(0-100 �mM NaCl)，RNase A可切割单链RNA、双链RNA以 及RNA-DNA杂合子中的RNA；然而当 NaCl浓度超过0.3M时，RNase A则特异性切割单链RNA (9)。
图1。RNase A活性。
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RNase A, DNase and protease-free
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