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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 服务名称:
CCK-8药物体外筛选或细胞增殖检测
- 提供商:
凯基生物
实验原理:CCK-8试剂中含有WST–8,它在电子载体PMS的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜产物(Formazan)。生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。
实验材料:CCK-8(日本株式会社同仁化学研究所),其它同MTT法
实验内容与方法:
1. 细胞计数、稀释细胞悬液,接种96孔细胞培养板,培养;
2. 加入含药培养基,同时设立阴性、溶媒及阳性对照组,培养;
3. CCK-8染色,测定;
4. 计数各组别抑制率及应用SPSS 17.0通过Bliss法计算IC50。
实验信息(客户提供):同MTT法
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文献和实验是用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞数目的一种高灵敏度,无放射性的比色检测法,可替代传统的MTT法。 二、用途 药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验等。 三、优点 使用方便,无需洗涤细胞,不需要放射性同位素和有机溶剂; CCK-8法能快速检测; CCK-8法的检测灵敏度很高,甚至可以测定较低细胞密度; CCK-8法的重复性优于MTT 法,产生的formazan 是水溶性的,减少因洗涤和溶解带来的误差; CCK-8法对细胞毒性小,可以多次测定选取最佳测定时间,与MTT 方法
,检测时间大概在 1 小时左右。不仅如此,CCK-8 对细胞的毒性极小,完全可以测完细胞增殖或药物毒性后再继续用细胞进行下游实验。下面小编就来为大家介绍一下 CCK-8 的具体情况。CCK-8 基本原理基本原理为:该试剂中含有 WST-8【化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2 H-四唑单钠盐】,它在电子载体 1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜产物
光谱) 图5 三种染料分别检测EdU孵育2h的Hela细胞(40X) EdU细胞增殖检测方法不需要剧烈的DNA变性操作,只需温和的细胞固定化和透化处理,能够较好地保护细胞形态、DNA整体结构及细胞内抗原识别位点,更适合结合其他染料或蛋白标记(如P65抗体)等进行多重标记,从而在细胞水平获取更多的直观多维特征信息,更适合深入开展细胞功能方面的研究。 图6 结合P65抗体和EdU,分析药物对细胞增殖及NF-KB信号通路的影响 该方法无需DNA变性,无需抗原修复,无需抗原抗体反应,简单
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