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- 2026年09月22日
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耐药细胞株的构建
- 提供商：
凯基生物
| 耐药细胞株的构建 | |
| 实验目的 采用体外低浓度梯度递增联合大剂量间断冲击方法诱导肿瘤细胞对特定细胞产生耐药性 实验材料：试剂：培养基（GIBCO），血清（CIBCO） 仪器：超净工作台、CO2培养箱、生物倒置显微镜 实验内容与方法： 1. 体外低浓度梯度递增联合大剂量间断冲击方法诱导细胞的耐药 2. MTT法测定药物对亲本细胞和耐药细胞的IC50，计算耐药指数 实验信息（客户）：1．生长状况良好的宿主细胞株，并提供细胞特性，培养条件及相关注意事项。 2．诱导剂 服务周期：6个月 结果提交：提交实验报告书（耐药指数、实验试剂与设备、实验过程、结果分析、原始数据、细胞图片等）；耐药细胞株、亲本细胞株 凯基已诱导建立了10余株耐药细胞株： A2780/Taxol（耐药指数：30）、Patu8988/5-FU(耐药指数：40)、Bel/5-FU（耐药指数：200）等 人卵巢癌细胞A2780 人卵巢癌细胞紫杉醇耐药株A2780/Taxol |
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文献和实验w_dennis 请教各位高人前辈，有做过基因的部分核苷酸缺失后，回补株构建实验吗？如何操作？ 请教下pBAD/gⅢ和pBR322质粒构建回补株的原理？叩谢！！:) woxingwosu 看看这个有没有帮助了： http://journal.shouxi.net/qikan/article.php?id=534304 w_dennis 谢谢，请问有pBAD/gⅢ和pBR
想长期表达某个基因，但它一高表达细胞就死、一过表达表型全是"中毒"——这时候很多老师会想到诱导表达系统： Tet 诱导稳定细胞株（Tet-On）怎么构建？和普通稳转株差在哪？诱导倍数怎么验证？ 先说结论： Tet 诱导稳转株的核心是把"表达开关"装进稳转系统：细胞先稳定表达调控蛋白（Tet-On 的 rtTA），再引入由 TRE 应答元件控制的目的基因。平时不表达或低表达，加入诱导剂（多西环素 doxycycline）后才按剂量诱导表达。构建框架仍是"感染 → 筛选 → 验证 → 冻存
想给内源基因加上荧光标签、引入点突变，或者在特定位点插入报告基因，就需要 CRISPR 敲入（Knock-In, KI）： CRISPR KI 稳定细胞株怎么构建？为什么 KI 比 KO 难、周期更长？怎么验证敲入成功？ 先说结论： KI 的核心是"Cas9 切割 + 同源重组修复（HDR）"：用 sgRNA 引导 Cas9 在特定位点切割，同时提供带同源臂的修复模板（供体），把目的序列精确整合到基因组特定位点，再经单克隆分选和 PCR+测序验证，得到基因型明确的 KI 稳转株。与 KO
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