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细胞增殖检测(BrdU)
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凯基生物
| 细胞增殖检测(BrdU) | |
| 实验目的:检测样品中细胞增殖情况 实验原理:在动物体内或细胞培养基中加入BrdU,细胞增殖过程中BrdU会参与核酸的合成,通过标记的BrdU抗体检测BrdU的分布,从而得出样品中细胞的增殖情况。 实验材料: 试剂:荧光标记或酶标抗BrdU抗体、固定液、破膜剂(或免疫组化试剂盒) 仪器:恒温孵育箱、低温离心机、荧光或光学显微镜、流式细胞仪等 实验内容与方法: 1.细胞或组织固定 2 .细胞破膜或组织包埋、切片、脱蜡、水化、抗原修复 3.一抗、二抗孵育 4.流式或显微镜检测 客户提供实验信息: 1、 实验信息(客户提供): 样品信息 (包括全称、来源、种属等) 指标名称 试剂信息 (包括一抗等) 2、 实验材料提供 (1)样本材料 ² 冰冻组织样品需超低温保存 ² 贴壁细胞必须爬片,本市可以上门取样后我们来固定,外地必须固定后再送样。悬浮细胞可充液或涂片固定好以后寄送 ² 石蜡包埋组织可包埋后或固定好以后寄送 (2)试剂: 客户购买凯基生物自产一抗、破膜剂、固定液、SP免疫组化试剂盒等。或可按客户要求代订和使用其它品牌公司试剂。 服务周期:2周至4周(具体视样品数而定) 结果提交:提交实验报告书(包括实验材料、试剂、仪器、实验过程方法、结果及分析)、原始数据、图片,文本或电子版。 小鼠注射BrdU后脑部皮层增殖检测 HELA细胞BrdU培养24h |
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文献和实验willion1985 直接测定DNA合成是细胞增殖检测的最准确方法之一,是测定物质毒性、评估药物安全评价、细胞健康的基本方法,其中以前常用的方式是利用胸腺嘧啶核苷酸类似物----BrdU进行检测。因为在细胞周期的S期,和细胞一起孵育的BrdU能渗入DNA分子中,再结合BrdU抗体与渗入DNA的BrdU特异性结合,就能够检测到DNA复制活跃的细胞。 但BrdU有一大缺点,就是需要变性DNA后才能与抗体结合,但这就破坏了DNA双链结构,影响了其他染料的结合
5-brdu 的分子量为307.1,将100mg分为三份30.7mg(0.1mmol),溶于1ml三蒸水,分装-20度保存。用的时候再稀释100倍,如在1ml溶液里加入10ul即可。尽量分装为小剂量,如100ul,避免反复冻融使其活性降低。1、BudR贮存液的配制BudR 5mg(先用0.5ml 1N NaOH溶解)然后加蒸馏水至5ml,即成1000ug/ml的贮存液,因BudR遇光会发生分解,贮存液需置棕色瓶并黑纸封瓶避光冰冻保存。 一般用的是用10μg/ml终浓度。2、终止细胞培养前,加入
直接测定DNA合成是细胞增殖检测的最准确方法之一,是测定物质毒性、评估药物安全评价、细胞健康的基本方法,其中以前常用的方式是利用胸腺嘧啶核苷酸类似物——BrdU进行检测。因为在细胞周期的S期,和细胞一起孵育的BrdU能渗入DNA分子中,再结合BrdU抗体与渗入DNA的BrdU特异性结合,就能够检测到DNA复制活跃的细胞。 但BrdU有一大缺点,就是需要变性DNA后才能与抗体结合,但这就破坏了DNA双链结构,影响了其他染料的结合染色,导致染色弥散,准确性降低等问题。哈佛
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