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- 2025年12月09日
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药物体外筛选或细胞增殖检测
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凯基生物
| 药物体外筛选或细胞增殖检测 | |
| MTT药物体外筛选或细胞增殖检测 实验目的：检测细胞增殖活力或检测样品对细胞体外增殖的影响 实验原理：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。 实验仪器：超净工作台、CO2培养箱、生物倒置显微镜、酶标仪 实验内容与方法： 1. 细胞计数、稀释细胞悬液，接种96孔细胞培养板，培养； 2. 加入含药培养基，同时设立阴性、溶媒及阳性对照组，培养； 3. MTT染色，测定； 4. 计数各组别抑制率及应用SPSS 17.0通过Bliss法计算IC50。 客户提供实验信息： 1、实验信息（客户提供）： 样品信息 （包括来源、全称等） 2、实验材料提供 （1）样本材料 新鲜或冷冻细胞不少于2×105个 （2）试剂： MTT、DMSO等常规试剂公司可以提供，相关药物需要客户自己购买，或委托我公司代购 服务周期：收到样品2周内提交结果（视样本数量适当调整周期） 结果提交：提交实验报告书（IC50、实验试剂与设备、实验过程、结果分析、原始数据、细胞图片等）。 CCK-8药物体外筛选或细胞增殖检测 实验目的：检测细胞增殖活力或检测样品对细胞体外增殖的影响 实验原理：CCK-8试剂中含有WST–8,它在电子载体PMS的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜产物（Formazan）。生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。 实验仪器：超净工作台、CO2培养箱、生物倒置显微镜、酶标仪 实验内容与方法： 1. 细胞计数、稀释细胞悬液，接种96孔细胞培养板，培养； 2. 加入含药培养基，同时设立阴性、溶媒及阳性对照组，培养； 3. CCK-8染色，测定； 4. 计数各组别抑制率及应用SPSS 17.0通过Bliss法计算IC50。 客户提供实验信息： 1、实验信息（客户提供）： 样品信息 （包括来源、全称等） 2、实验材料提供 （1）样本材料 新鲜或冷冻细胞不少于2×105个 （2）试剂： CCK-8、DMSO等常规试剂公司可以提供，相关药物需要客户自己购买，或委托我公司代购 服务周期：收到样品2周内提交结果（视样本数量适当调整周期） 结果提交：提交实验报告书（IC50、实验试剂与设备、实验过程、结果分析、原始数据、细胞图片等）。 SRB法药物体外筛选或细胞增殖检测 实验目的：检测细胞增殖活力或检测样品对细胞体外增殖的影响 实验原理：磺酰罗丹明是一种能与生物大分子的碱性氨基酸结合的水溶性蛋白染料，其结合于细胞中的量的多少可以反映总蛋白量进而反映细胞数的多少。在515nm波长处的OD值与活细胞数呈良好的线性关系。 实验仪器：超净工作台、CO2培养箱、生物倒置显微镜、酶标仪 实验内容与方法： 1. 细胞计数、稀释细胞悬液，接种96孔细胞培养板，培养； 2. 加入含药培养基，同时设立阴性、溶媒及阳性对照组，培养； 3. SRB染色，测定； 4. 计数各组别抑制率及应用SPSS 17.0通过Bliss法计算IC50。 客户提供实验信息： 1、实验信息（客户提供）： 样品信息 （包括来源、全称等） 2、实验材料提供 （1）样本材料 新鲜或冷冻细胞不少于2×105个 （2）试剂： SRB、DMSO等常规试剂公司可以提供，相关药物需要客户自己购买，或委托我公司代购 服务周期：收到样品2周内提交结果（视样本数量适当调整周期） 结果提交：提交实验报告书（IC50、实验试剂与设备、实验过程、结果分析、原始数据、细胞图片等）。 实验范例 氟尿嘧啶对人肺癌细胞A549体外增殖的影响 |
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文献和实验willion1985 直接测定DNA合成是细胞增殖检测的最准确方法之一，是测定物质毒性、评估药物安全评价、细胞健康的基本方法，其中以前常用的方式是利用胸腺嘧啶核苷酸类似物----BrdU进行检测。因为在细胞周期的S期，和细胞一起孵育的BrdU能渗入DNA分子中，再结合BrdU抗体与渗入DNA的BrdU特异性结合，就能够检测到DNA复制活跃的细胞。 但BrdU有一大缺点，就是需要变性DNA后才能与抗体结合，但这就破坏了DNA双链结构，影响了其他染料的结合
5-brdu 的分子量为307.1，将100mg分为三份30.7mg（0.1mmol），溶于1ml三蒸水，分装-20度保存。用的时候再稀释100倍，如在1ml溶液里加入10ul即可。尽量分装为小剂量，如100ul，避免反复冻融使其活性降低。1、BudR贮存液的配制BudR 5mg（先用0.5ml 1N NaOH溶解）然后加蒸馏水至5ml，即成1000ug/ml的贮存液，因BudR遇光会发生分解，贮存液需置棕色瓶并黑纸封瓶避光冰冻保存。 一般用的是用10μg/ml终浓度。2、终止细胞培养前，加入
一、原理荧光染料CFSE， 也可称为CFDA SE（5，6- carboxyfluorescein diacetate，succinimidyl ester） 即羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂，是一种可穿透细胞膜的荧光染料，具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团，这使得CFSE成为一种良好的细胞标记物。当CFSE以含有两个乙酸基团和一个succinimidyl ester功能基团的形式存在时，不具有荧光性质，而具有细胞膜通透性，能够自由进入细胞
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