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问
分选CD4 CD8细胞之后死细胞太多了,有什么方法可以保护细胞的活性吗?
dxy_29k93ve4
分离细胞的时候可以加2% 的FBS,MACS分选的时候可以降到0.5% 给他一点营养,别让他饿着
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问
磁珠分选T细胞该选什么柱子?
dxy_29k93ve4
一般根据细胞数选用的柱子,每种柱子能挂的细胞数不一样
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问
分选后共培养会有影响么?MLR怎么做?
西柚味的芋圆
磁柱本身是不带磁性的。 2、T细胞需要新鲜最好 3、有IL-2可以,没有也行,T细胞培养基中最好有2-ME
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问
磁珠分离时出现堵柱现象怎么办?
pppeachya
细胞悬液用 300 目滤网过滤一次,过柱前重悬细胞时再加大液体体积试试~
22 回答
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问
抗体非还原胶显示多种状态,怎么判断活性占比,如何更好分离?
peaceful13
不同条带的区别主要是分子量大小的不同~想要的组分需要了解你的目标抗体的分子量大小通过marker的条带去确定该分子量位置,如果纯化效果不佳~可以考虑一下protein G
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问
流式细胞周期模型 RMSD 值为什么这么大?
dxy_0mxazdaw
这个与你流式电压调的太大有关系。另一方面,加入的染料或者抗体浓度有可能过高,建议新买的抗体或者染料做一个梯度稀释,寻找到最合适的染色浓度。
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问
病毒感染可以做MTT吗?
西柚味的芋圆
可以用cck8 做吖,做起来比较简单。就是加板子比较废眼睛。MTT也可以,但是没有CCk.8简单吧
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问
流式细胞术测不同浓度LPS刺激12h后RAW264.7 ,ROS 结果分析问题
西柚味的芋圆
你做这个的时候有没有用考虑到自发性荧光的影响。同时巨噬细胞类的检查需要先孵育Fc
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问
关于小鼠肾脏冰冻切片直接免疫荧光问题1
西柚味的芋圆
当然需要罐洗,我一般用4百分之四的多聚甲醛进行罐柱
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问
免疫细胞化学检测采用SP法和SABC法的结果为什么不一致?
西柚味的芋圆
那只能重新检测一下标本,同时做俩种方法,确保所用的一抗识别同一克隆位点
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问
请问elisa实验中,空白、阳性对照、阴性对照均显色,可能是什么原因?
西柚味的芋圆
那肯定是你洗板子没有洗干净。或者你在加样的过程中导致标准品漏了
6 回答
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问
将酶免疫技术中的间接法改为一步法合理么?
peaceful13
可以的~主要是一步法的检测灵敏度会比较低,
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问
流式细胞技术测定细胞内游离钙浓度为何要使用氯化钙?
peaceful13
主要为了保持缓冲液的钙离子浓度~避免影响最终实验结果,因为胞内外离子浓度差异较大~会快速引起钙离子的变化
7 回答
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问
Elisa数据负值怎么才能做出正的来?
西柚味的芋圆
blank孔是否污染了吧 样本是否浓度是否在曲线范围之内3 、板子是否脏?导致孔与孔之间不一致
8 回答
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问
请教ELISPOT斑点模糊问题
西柚味的芋圆
我的推测是包被的抗体的问题。你这个我自己包被的时候遇到过,但是已经包被好的板子这样的话,不知道原因,是不是没洗干净呢,洗板液要用PBS不能用PBST
4 回答
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问
怎么定阴性对照?及阳性cut-off值呢?
CXCR3
阴性对照可以是空白的对照,不加样品。阳性对照在没有样本的情况下我们会根据说明书的的结果。
9 回答
1197 围观
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问
组织免疫荧光失败问题
西柚味的芋圆
可能是二抗保存不放。这种散在的光点就要看你的洗液了,最后一步封片之前要用去离子水而不是pbs洗,这些非特异性的光点可能是离子染色导致的
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问
如何检测人的肝脏内免疫活性细胞(调节性T细胞或自然杀伤性T细胞)的数量和功能?
西柚味的芋圆
流式的方法应该是可以的 可以通过流式的方法去检测人穿刺的肝脏样本中免疫细胞的活性。先剪碎组织,用0.5mg/ml collagenase IV 消化 37℃ 30min。 消化之后过滤离心,裂红。得到免疫细胞之后就可以计数。 利用流式抗体,可以检测Treg和NK细胞的细胞因子 如TNF-a IFN-gamma等。 但是这些胞内因子的检测需要加刺激计,对细胞数量和活性都有一定的要求
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问
ELISA抗原包被问题
西柚味的芋圆
4度过夜(指12h)包被效果不太好. 包被抗原浓度不确定,没定量,可能你的蛋白量太少(最有可能) 没有封闭的步骤 一抗稀释倍数不清 你的洗涤影响不会很大,一般没问题.
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问
用免疫荧光的方法检测 LC3 可以么?怎么计算?
西柚味的芋圆
免疫荧光染的是会同时染LC3I 和II 的,这种方法也没问题,在正常细胞和受刺激的细胞中都会有LC3的光点,二者的区别是受刺激的成团块状,正常的呈散点状。。。在一些可能会影响LC3的翻译的条件下,可能受刺激的细胞表现为光点也会变多,这个好理解。。。而在自噬基础水平比较低的状态,给了刺激可能也看不出太大区别时可以考虑转染,相当于给个放大镜,放大这一过程。
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