实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问流式中检测细胞表面和细胞内蛋白表达水平的抗体有何区别？

丁香实验

抗体只是针对相应抗原的，至于是针对胞内还是胞膜对你检测来说并无明显影响，你只需要查清楚到底是针对哪一个部位的抗原的，应该是可以用同一种抗体进行检测的，在流式操作时只需注意：如果是针对胞内，则需要加破膜剂，让抗体能和相应抗原接触，否则就不需要了。

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问流式同型对照怎样选择？

丁香实验

同型对照：是指与MoAb相同的、未免疫小鼠的免疫球蛋白亚类，若使用直接免疫荧光染色法，同型对照也应标记荧光色素，如IgG1 FITC、IgG2ａ、PE等。主要考虑了细胞的自发荧光、FC受体介导的抗体结合和非特异性抗体结合等影响因素。此外，同型对照与MoAb所标记的荧光色素、浓度、F：P比值（标记的荧光色素与免疫球蛋白分子的比值）应该相同为最佳，这对准确设定阴性与阳性细胞的界标有重要意义，切忌使用与

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问最近细胞总是复苏失败，是什么原因？

shijunwen2007

细胞冻存和复苏的原则是慢冻快融，只要按着这个标准去做，一般细胞都不会受太大的损伤。你说细胞细胞在冻存后复苏一开始成活率还好，最近复苏不成功，考虑是冻存后保存的原因，是-80度还是液氮保？-80度保存是否由于经常开启导致温度经常波动？温度的经常性波动致使冻存细胞受到损伤，所以复苏不成功。

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问中杉金桥的二步法免疫组化试剂盒要不要加封闭？液

boborsky

两步法不用加吧，我是用的dako的envision两步法，不用加血清封闭的。

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问请问50xPIC是什么呀？

1 回答2038 围观

问请问分离 PBMC 的具体实验步骤？

剑弦滴血

可以用分离液分离，你想分离小鼠的还是人的？

1 回答2293 围观

问为什么 IP 样品条带位置总和 Input 条带位置不一致？

1 回答6148 围观

问石蜡切片制作时为什么切片组织总是有横向裂纹？

mumaren640830

1.切片机刀片不快。2.温度高

9 回答10374 围观

问有能装下 500ml 样品的透析袋吗？

1198 围观

问WB目的蛋白时而能发出来，时而发不出来，是为什么？

730 围观

问WB条带发光两端暗中间淡为什么？

2955 围观

问复苏后的干细胞是 1 代细胞吗？

2742 围观

问用冻存的肾脏组织提取蛋白，加上裂解液裂解，上清液为红色的，能不能继续往下做呢？

1790 围观

问请问可以在哪儿查到WB的目的蛋白大小

1568 围观

问划痕实验需要划几条啊？

1310 围观

问神经胶质细胞经摇床振摇纯化18h，星形胶质细胞没了

新叶FJ31

请问一下你的分离步骤

1 回答1354 围观

问RNA提取中 260/280的值怎么样算好？研磨到什么程度是可以进行下去？

极客医生

1.可能还是操作步骤方面的原因。加完氯仿后震摇充分点，离心后取少一点上清，不要贪多，还有乙醇洗涤的时候可以适当轻柔吹吸几遍2.测量是指荧光定量PCR的时候双峰？3.研磨到无明显固体颗粒就行

1 回答2508 围观

问CRISPR 构建点突变细胞系是杂合突变好还是纯合好？

dxy_g1lhlo40

这个不用纠结，你构建细胞系的时候，杂合子和纯合突变单克隆都是有一定概率能获得的，到时候你做实验的时候都保留，进行对比。这样实验数据就更有说服性

1 回答4889 围观

问大鼠注射STZ后为什么血糖反而比之前降低了？

lan_hf

说明造模没有成功。30mg/kg剂量不算大的，另外，造模与老鼠的状态，配置的试剂，注射的方式等等都有关。不成功也可以再次注射。

2 回答3928 围观

问细胞污染

raulw2003

大家都说了很多方法了，我记得去以前带的师妹做细胞老是污染，后来我看她操作的时候发现她的手上戴了手链，去掉手链后就没有再污染了。你可以注意一下。

29 回答12328 围观

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