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        分选CD4 CD8细胞之后死细胞太多了,有什么方法可以保护细胞的活性吗?

        相关实验:肿瘤干细胞的分离纯化

        user-title

        丁香实验

        我用的MACS分选器,BD的试剂,分选CD4 CD8细胞之后死细胞太多了,上流式细胞仪检测到得细胞数太少。有什么方法可以保护细胞的活性吗?

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        11 个回答

        user-title

        dxy_29k93ve4

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        分离细胞的时候可以加2% 的FBS,MACS分选的时候可以降到0.5% 给他一点营养,别让他饿着
        user-title

        西柚味的芋圆

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        操作过程,及组织处理过程一定要尽量冰上操作,动作轻柔。同事要在buffer中添加血清。离心力不能过大。可以买美天妮配套的buffer 获取细胞的过程要用2%FBS的PBS悬细胞。如果担心细胞状态不好,可以增加FBS的浓度。标记beads和MACS上柱的过
        user-title

        CXCR3

        有帮助
        获取细胞的过程要用2%FBS的PBS悬细胞。如果担心细胞状态不好,可以增加FBS的浓度。标记beads和MACS上柱的过程,用低浓度FBS的EDTA PBS溶液。
        user-title

        咸水鱼rain

        有帮助
        用含有血清的PBS,我们使用的是含有0.5%FBS的PBS,MACS过程要快一点,尽量在冰上操作。
        user-title

        空山流水Hz

        有帮助
        1.尽量减少离心次数和离心速度 2.一直保持4℃低温。离心机调为4℃,其余时间放在冰上 3.吹打混匀尽量轻柔
        user-title

        sk1981521

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        细胞分离和消化的酶要选择温和一些的酶,分选采用低压和大喷嘴
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        dxy_0mxazdaw

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        在提取细胞的过程中,要一直使用含有1-2%FBS的PBS或者培养基,我们实验室比较奢侈,一直都用的含有血清的培养基,这样细胞状态会很好。并且,加快实验速度也是十分必要的。
        user-title

        txs900416

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        使用0.5%的bsa-pbs做缓冲液可以有效保持细胞活性,另分选最后可用培养基重悬细胞,分选时间不宜过长等
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        peaceful13

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        磁珠分选过程中,细胞死亡比较多,可以查看一下几个方面:细胞制备过程中,尽量不要用含有EDTA的Buffer,然后低温进行操作,等到要上分选柱子的时候,再换成磁珠分选用的Buffer,如果是分选Naive的细胞,制备完成后,可以让细胞在室温静置半小时再进行分选,效果会更好一些;分选过程中尽量低温,上柱子之前过筛网,操作过程中尽量不要产生气泡
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        颜渊溪桥

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        你用什么方法分选的,如果用公司的试剂盒Mojo/stem cell分选后的细胞非常好,如果是组织里用流式分选,只能是分选时下面的培养基适当提高血清含量,分选后的细胞体外培养可以加IL-7提高生存率
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        Timy最爱柠檬水

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        1.保证全程冰上操作,适当减少抗体及磁珠孵育时间; 2.体系中加入0.1-1%FBS,维持细胞代谢能力; 3.减少离心时间,降低离心转速。
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