抗体非还原胶显示多种状态，怎么判断活性占比，如何更好分离？
丁香实验
重组抗体rProtein A提取后，跑非还原胶，有很多条带，有没有朋友帮忙解答我的困惑：
1.不同条带区别是什么呢？2.怎么知道那个组分是我要的正确结构呢？3.抗体精纯效果不是很好，不能把这些条带区分开（下面各泳道都是我不同的精纯条件），所以难以分别判断活性，请问有没有好的纯化方法推荐呢？
非还原SDS-PAGE 12%凝胶： 
12%还原胶：
5 个回答
西柚味的芋圆
有帮助
我感觉是样本降解了，或者说在某种状态下蛋白激活，产生了几个片段
txs900416
有帮助
如果纯化效果不佳，可以考虑一下protein G，培养基或者血清中有大量蛋白，prote inA/G的柱子会结合很多非特异性的蛋白
dxy_0mxazdaw
有帮助
有可能是样本降解了，或者样本中有污染，建议制备好样品后，尽早点样；还有一个原因，有可能上样缓冲液时间太久了，有效成分失效了，建议妥善保存各种试剂，避免反复冻融。对于重要的样本，建议用新的上样缓冲液，这个时候就别怕浪费了！
Timy最爱柠檬水
有帮助
可能是因为该蛋白是一个多聚体，存在多种结构，或者是蛋白提纯过程中受到了污染。
peaceful13
有帮助
不同条带的区别主要是分子量大小的不同～想要的组分需要了解你的目标抗体的分子量大小通过marker的条带去确定该分子量位置，如果纯化效果不佳～可以考虑一下protein G
![2,4-二氯-1-萘酚[用于照相技术]，2050-76-2，≥97%(GC)(T)，阿拉丁](https://img1.dxycdn.com/p/s14/2024/0619/923/2131019441498633081.jpg!wh200)
关于丁香通
公司信息
个人用户
企业机构
提问
扫一扫
实验小助手
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序