免疫磁珠分离细胞，是否要经过封闭？
丁香实验
免疫磁珠分离细胞，是否要经过封闭？现在采用间接免疫磁珠分离干细胞的方法
一直采用的方法是：
10%BSA封闭一小时，
抗体/培养基稀释 4度孵育半小时
二抗磁珠/pbs稀释 4度孵育半不时
刚分离出的细胞状态还可以，但是养几天就不是很好了，考虑是否是因为操作时间太长。最近看了几篇文献，好像他们用磁珠分离都没有使用封闭的过程。而是在抗体的稀释液中加入0.1%血清。请问这样做是否有道理？
8 个回答
西柚味的芋圆
有帮助
一般不封闭吧，我是严格按照说明书的步骤来的，用的美天妮的磁珠分选，但是分选成功后，检测纯度的时候可以封闭
dxy_29k93ve4
有帮助
我们一般用CD16/32封闭细胞，稀释一百倍使用，四度十五分钟
CXCR3
有帮助
我们一般不对磁珠分选的细胞进行封闭，细胞状态不好的话，需要在分选的过程增加FBS的浓度
dxy_0mxazdaw
有帮助
要封闭，不过不需要那么久，可以用Biolegend公司的Anti-CD16/32抗体去封闭，只需要10-15分钟就可以了。同时为了保证细胞状态良好，建议在提取细胞的整个过程中都在提取液中加1%-2%FBS或者BSA，既可以达到封闭效果，也可以保证细胞状态。
莹啊免疫啊
有帮助
我做的时候没封闭，我细胞是原代T细胞，后续还要用来杀伤，像你那么封闭怕是没封闭完呢就死光了，不能只用一个抗体吗，一定要用二抗吗，查查看有没有只用一个抗体的办法？
peaceful13
有帮助
封闭式非常有必要的～而且要看你主要是要封闭什么？一般BSA封闭只是起到一些化学键等引起的封闭效果～磁珠分选技术里主要是跟抗体偶联的～所以需要封闭细胞上Fc受体的表达～所以用抗体来源的血清去封闭效果是比较好的～或者使用商业化的封闭剂
Timy最爱柠檬水
有帮助
磁珠分选的过程中会有非特异结合，但这种非特异结合对目的纯度的影响要视具体情况而定，如果要求纯度极高，建议使用封闭抗体CD16/CD32或血清全IgG抗体进行封闭。如果对分选纯度要求不高，则不可进行封闭。 另外，在整个分选过程中应加入0.1-1%FBS，以保证细胞活力及维持代谢。 而且，分选全程应在冰上进行。
txs900416
有帮助
是否封闭取决于分离的细胞是否有FcR，例如T、B细胞一般不需要封闭，巨噬细胞等有FcR的需要用cd16/32抗体封闭。此外，细胞在pbs中太久会影响细胞状态。
相关产品推荐
相关问答
关于丁香通
公司信息
个人用户
企业机构
提问
扫一扫
实验小助手
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序