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        请问elisa实验中,空白、阳性对照、阴性对照均显色,可能是什么原因?

        相关实验:ELISA 实验

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        丁香实验

        想要利用生物素亲和素系统、通过间接elisa和双抗原加心elisa,检测样本中的抗体。使用了间接elisa试剂盒中的抗原包被板,索莱宝的生物素标记羊抗人IgG,自制NHS-biotin标记的羊抗人IgG,自制NHS-Biotin标记的抗原,索莱宝链霉亲和素标记HRP,其他试剂均使用试剂盒中自带的试剂,包括样本稀释液、洗涤剂、显色剂、终止剂等。结果如下
        图片描述我想请问,为什么会产生这样的结果,为什么自制的试剂空白孔、阳性对照孔、阴性对照孔均显色,我知道当然是自制的试剂肯定有问题,但是如果是没有标记好,应该不显色才对呀,怎么会都显色呢,除了自制的试剂其他都是用商品化的试剂,洗板也是用的洗板机,问题出在哪里呢?
        生物素标记物的制备:抗原或抗体200μL即1mg(母液为PBS),200μL 即2mg B-NHS(溶于DMSO),混匀,置于冰盒中反应2 h;置于室温下反应0.5 h;置于0.05 M CB中透析。加入等体积甘油(即400μL),分装,-20°C避光保存。

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        6 个回答

        user-title

        西柚味的芋圆

        有帮助
        那肯定是你洗板子没有洗干净。或者你在加样的过程中导致标准品漏了
        user-title

        CXCR3

        有帮助
        可能在标记的过程中产生了非特异性的结合,可以减少敷育的时间或者浓度。
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        dxy_0mxazdaw

        有帮助
        按照你的实验数据来看,添加的试剂本身会有本底显色反应,也就是说背景比较高,但是一般不会影响实验结果,因为在计算浓度时,我们的拟合公示是会扣除背景值的。
        user-title

        txs900416

        有帮助
        看上去像是制备的时候igg太浓了,不要超过0.5-5ug/ml为宜。太浓了可能产生非特异性结合
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        peaceful13

        有帮助
        受污染的问题可能性比较高~像一些Buffer或者配置缓冲液用的水~都需要检查一下
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        Timy最爱柠檬水

        有帮助
        1.适当减少二抗孵育时间,或降低二抗浓度; 2.确保不存在孔间污染。
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