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实验问答

28,918,745 科研人在看

问请教细菌培养是否污染？

鱼小

我的判断是：1、没有染菌。2、同一条链上大小不一很正常，我很多实验都是这样。这个和菌种、生长时间等都有关的。3、那些非常小的应该是刚分裂出来的。4、枯草杆菌一般都不是成链状的，不过我有几次摇瓶出来染色后也成链状。5、真的感觉没有染菌，可以做做16s rna鉴定！

3 回答828 围观

问直接提取DNA的电泳图发现有两条带，且与目标大小不一致

猪美美的小蘑菇

你的marker是多大的，如果marker使用没有错误的话，下面两条带看着像引物二聚体

2 回答1125 围观

问曝光后膜全黑，不知道是什么原因？

此用户已注销

问题已经解决了，是一抗和二抗浓度过高了

2 回答1950 围观

问做出来的有差异表达的蛋白，又做了一批用WB的无差异？

Du杜杜杜

p 0.03，这个值很大的了，假阳性率很高，一般至少都是p＜0.05.蛋白质组学是一个非靶向的实验，并不是一个靶向实验，所以有假阳性的结果是很正常的，即使验证也是选取的P值较小的，且FC值变化较大的。

2 回答903 围观

问小鼠心脏采血要麻醉吗，能采多少？

丁香实验

用1ml一次性注射器先抽取血液，再转入含有肝素的取血管中即可，此操作过程没有发生凝血现象。但产生了严重的溶血，不知其原因，望不吝赐教。

1 回答1181 围观

问想分离支原体不知如何选择培养基？

丁香实验

利用葡萄糖的支原体：肺炎支原体----支原体肉汤培养基；利用精氨酸的支原体：口腔支原体、唾液支原体、人型支原体----精氨酸支原体肉汤培养基；利用尿素的支原体：T 株支原体 (解脲支原体)—--解脲支原体培养基鸡毒支原体------改良 Frey 培养基用于固体培养时：以上支原体都可以接种于支原体琼脂培养基上。

1 回答1193 围观

问免疫共沉淀coip的对照问题

晓柒SQJZ

从您的这个结果来看，蛋白A的检测系统没有work，检查Anti-A抗体的用途，是否是WB，IP通用的抗体，有些抗体只能识别线性表位或只能识别空间表位

2 回答951 围观

问免疫共沉淀中珠子预吸附和IgG的问题

丁香实验

你这边所说的非特异性蛋白大致可以理解为能够与protein A琼脂糖珠结合的蛋白；包括能与protein A结合蛋白和与agrose结合的蛋白。这样做毫无疑问会降低非特异结合，但是也要考虑到这一步的局限性：1、是有可能把目的蛋白拉下来的，因为有些蛋白确实会跟proteinA结合，你恰好是做这这样的蛋白就有可能出现这个情况。2、这种方法也没办法把所有非特异结合蛋白去除，所以也不用担心把你的目的蛋白拉

1 回答336 围观

问AAV病毒纯化方法及感染细胞的实验方法，及相关注意问题？

丁香实验

AAV的纯化1）向病毒浓缩液中添加固体 CsCl 直到密度为1.41 g/ml（折射率为1.372）；2）将样品加入到超速离心管中，用预先配好的 1.41 g/ml CsCl 溶液将离心管剩余空间填满；3）在 175,000 g 下离心24 小时，以形成密度梯度。按顺序分步收集不同密度的样品，取样进行滴度测定。收集富集有AAV 颗粒的组分；4）重复上述过程一次。5）将病毒装入100 k

1 回答1524 围观

问病毒做TCID50确定滴度的问题

丁香实验

如果有cpe而没有荧光，应该修饰区域的丢失。我之前遇到过这种情况。

1 回答1163 围观

问为什么病毒纯化中peg6000沉淀不能溶解？

丁香实验

自己做个结论，是资料上使用的离心机和我使用的离心机不一样，我使用的相同转速，离心力要大于资料上的，在做了离心力换算，调整转速后，问题解决了。所以，以后看见资料上写转速的，一定要小心了，很可能就是一大坑。

1 回答2435 围观

问关于RNAi转染效率的问题

丁香实验

不知道你是采用反义核苷酸还是siRNA，是直接导入anti－sense或者siRNA片段还是采用构建干扰质粒的方法，如果是直接导入寡核苷酸片段，只能采用特定的干扰转染试剂，推荐Ambion公司的转染试剂，如果是构建的干扰质粒，则可以采用质粒通用转染试剂，比如罗氏的FuGENE 6，效果不错。上述两种试剂都可用于普通质粒转染，优点是操作程序简单，尤其是Ambion的细胞毒性小。我做过许多细胞株，包括

1 回答965 围观

问transwell试验细胞计数

丁香实验

1. 一般会用相同的面积孔板，摸索24小时长满的细胞的接种量。2. 铺时，吸掉原来的培养基，我们做侵袭实验时，两种细胞所用的培养基不一样。3. 上室细胞背面计数：先用4%聚甲醛固定，清洗后，用吉姆萨染色，染色后，就能在显微镜下选择10个视野进行计数。

1 回答1820 围观

问如何准确的细胞计数方法？

丁香实验

如果你要做别的，我不好说，如果做RNA提取，不必太紧张，RNA提取很容易的，对细胞数的要求也不必太严格，可以说很松地依经验加上1-2ml裂解液就可以了，有你计数的功夫，RNA可就变质了，要记住，RNA在生长活跃的细胞中最好，任何的温度，渗透压等因素改变都会影响ＲＮＡ的，这个过程可很快。所以，不要消化，洗涤，和计数、，直接把裂解液加上就可以了，经验比说明书更管用！！1.我讲过“有计数的功夫，RNA就

1 回答973 围观

问细胞冻存液DMSO浓度是10％还是20％？

丁香实验

DMSO不能超过10%，因为有细胞毒性，一般都采用10%，血清一般用30%到40%，当然再多一点血清也没有坏作用，只是浪费而已。一般来说，DMSO：血清：培养基的体积比为1：3：6或1：4：5。冻存液最好现配现用，不易放的时间过久（一般不超过一个月）。但刚配好的冻存液会产热，需放置一会才能用于悬浮细胞。冻存细胞（以50ml培养瓶）时，先将冻存液按DMSO：血清：培养基的体积比按1：4：5配好，再处

1 回答4083 围观

问原核生物与真核生物翻译起始阶段有何异同？

丁香实验

相同之处：（1）都需生成翻译起始复合物；（2）都需多种起始因子参加；（3）翻译起始的第一步都需核糖体的大、小亚基先分开；（4）都需要mRNA和氨酰- tRNA结合到核糖体的小亚基上；（5）mRNA在小亚基上就位都需一定的结构成分协助。（6）小亚基结合mRNA和起始者tRNA后，才能与大亚基结合。（7）都需要消耗能量。不同之处：（1）真核生物核糖体是80S（40S+60S）；eIF种类多（10多

1 回答1428 围观

问细胞培养的前期工作准备有哪些？比如器皿的消毒处理？

东月来星

我无聊跟你说说吧，1. 离心管、头、棉球、培养瓶、玻璃容器等需要消毒处理吗？高压还是浸泡？离心管、头之内的高压灭菌即可。棉球用酒精配。培养瓶和玻璃容器可以泡酸洗涤在高压。具体酸的配方论坛里就有。配个次强酸就行。可以用好久的。注意安全就好。2、血清需要过滤吗？还是需要怎样处理？不用过滤。关于灭活论坛里看法不一，自己收收看，自己选择。3、PBS配置后需要高压吗？高压，不高压，细胞污染了咋办。4、

1 回答933 围观

问如何提高DNA提取纯度？

丁香实验

手工可以用吸附柱，全自动用磁珠的比较多。一般来说柱提法要比磁珠法提取的纯度要高，楼主还是换用柱提法的试剂盒吧，QIAGEN，天根，百代BIOG都有柱提法的试剂盒。

1 回答1665 围观

问人工提取血凝块DNA，捣碎血凝块有什么好方法？

丁香实验

1.可以用纤溶酶处理, 比如tPA,2.或者直接用小的玻璃匀浆器研磨,3.很奇怪,血凝块中的血小板和红细胞是主要成份,有核细胞少的很,你如何这样提DNA, 为什么不用血液或其它组织来提

1 回答704 围观

问如何检测两个蛋白质相互作用的强弱？

丁香实验

免疫共沉淀Co-IP。1. 转染，A与WT/MUT分别共转细胞；2. 裂解后，用anti-A抗体与lysates孵；加入结合抗体的proteinA/G beads结合；3. 洗beads。4. 洗脱。5. WB，观看结合在beads上的A,B多少。A做内参control。看结合的B的差别。

1 回答1192 围观

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