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        免疫共沉淀中珠子预吸附和IgG的问题

        相关实验:免疫共沉淀(Co-IP)

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        丁香实验

        1、在免疫共沉淀中,有一步是“每1ml总蛋白中加入100微升protein A琼脂糖珠(50%),4摄氏度摇晃10分钟(EP管插冰上,置水平摇床上),以除去非特异性杂蛋白,降低背景。再4°离心将上清转移到新的EP管”不是很明白这个非特异性蛋白是指什么?为什么不会把我的目的蛋白也吸附下来?并且离心后沉淀就是珠子拉下来的非特异性蛋白?上清还是所提的蛋白吗?

        2、IgG是在什么时候加呢?目的是为了证明抗体的特异性吗?

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        1 个回答

        user-title

        丁香实验

        有帮助

        你这边所说的非特异性蛋白大致可以理解为能够与protein A琼脂糖珠结合的蛋白;包括能与protein A结合蛋白和与agrose结合的蛋白。这样做毫无疑问会降低非特异结合,但是也要考虑到这一步的局限性:

        1、是有可能把目的蛋白拉下来的,因为有些蛋白确实会跟proteinA结合,你恰好是做这这样的蛋白就有可能出现这个情况。

        2、这种方法也没办法把所有非特异结合蛋白去除,所以也不用担心把你的目的蛋白拉下来。

        IgG是你的抗体对照,是排除IgG非特异结合用的,在这一步之后,需要把离心上清均分两份,一份抗体,一份同种属的IgG。

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