关于免疫荧光细胞效率的问题

内源性原因就是你的细胞长的太密了。外源性可能是你转染造成的。还有可能更你做一抗二抗有关。

与蛋白表达、抗体选择、孵育时间温度及荧光显微镜应用都有一定的关系

常见问题一：信号弱或无信号，染色细胞过少

可能原因：

1.目标蛋白在细胞中没有表达

2.表达目标蛋白的细胞过少

3.细胞通透性差

4.染色前的固定步骤破坏了抗原表位

5.通透使抗原丢失

6.抗体不识别

7.一抗稀释度过大

8.二抗选择错误

优化方案（与以上原因相对应）：

1.制备细胞裂解液，用Western Blotting验证目标蛋白在细胞中是否表达

2.标本中使用更多的细胞，试用其他瞬时转染方法，或者使用稳定转染细胞系

3.增加通透剂作用的时间或者浓度，或改用其它的通透剂

4.改用其他固定方法

5.减少通透剂作用的时间或强度

6.换用其他抗体

7.同一样品按zui佳的二抗用量作一抗稀释曲线，以确定zui佳的一抗稀释比例

8.使用正确的二抗