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        流式细胞术单细胞悬液制备如何获得更明显的分群?

        相关实验:基于荧光共振能量转移的 HIV-1 病毒的融合分析实验

        user-title

        dxy_8y6odnaq

        本人实验小白 曾经做过几次免疫评价 但是有的时候会遇到细胞分群不明显 T细胞容易翻车 想问问大佬们有没有更好的处理细胞的技巧和注意点?

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        4 个回答

        user-title

        peaceful13

        有帮助

        样本处理过程中,尽量保持细胞的活性,如果有酶消化过程,需要摸索一下酶的使用类型和处理时间,尽量减少对细胞表面蛋白抗原的影响,如果处理过程中细胞死亡比较多,可以用上死活染料排除死细胞的影响。当然,有一些指标本身表达就是不分群的,所以需要对自己检测的抗原要有所了解

        user-title

        txs900416

        有帮助

        T细胞染色要看T细胞的富集程度,例如淋巴器官中,若不分群,主要考虑细胞量过大抗体量不足;若TIL或者其他组织中来源T细胞,还需要考虑细胞分离不好、T细胞丰度较低的因素,建议去除实质细胞背景,加染白细胞标志CD45,圈出cd45阳性细胞群再分析。

        user-title

        颜渊溪桥

        有帮助

        看组织,如果是淋巴器官,脾脏,淋巴结等非常好做,研磨完了取适量(不能太多,影响染色)染色,上机器前用200目滤网过下。如果是肝脏。肺等就要胶原酶消化,percoll后检测了。

        user-title

        小暮

        有帮助

        参考样本制备基本原则:1.使各种液体和悬浮细胞样本新鲜,尽快完成样本制备和检测;2.针对不同的细胞样本进行适当洗涤、酶消化或EDTA处理,以清除杂质,使粘附的细胞彼此分离而形成单细胞状态;3.对新鲜实体瘤组织可选用或联用酶消化法,机械打散法和化学分散法来获得足够数量的单细胞悬液;4.对石蜡包埋组织应先切成若干40-50μm厚的蜡片,经二甲苯脱蜡到水后,再用前述方法制备单细胞悬液;5.单细胞悬液的细胞数不应少于107个/ml。

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